细胞生物学实验报告

时间：2024-05-15 08:45:19 蔼媚报告我要投稿

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细胞生物学实验报告

　　在生活中，大家逐渐认识到报告的重要性，报告具有成文事后性的特点。写起报告来就毫无头绪？下面是小编整理的细胞生物学实验报告，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。

细胞生物学实验报告

　　细胞生物学实验报告 1

　　一、实验目的

　　了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度

　　二、实验原理

　　1、在等渗溶液中，细胞对各种溶质的透过性不同。有的溶质可以进入，有的溶质不能渗入。

　　2、渗入的溶质能提高细胞的渗透压，促进水分子进入细胞，引起溶血现象。

　　3、不同的溶质渗入到细胞内的速度不同，因此溶血时间也不同。

　　三、实验材料

　　新鲜血液（鸡血、猪血、牛血等）

　　四、实验器材

　　试管（1.5cmX18cm）、试管架、10ml移液管、1ml移液管、200ml烧杯（2个）、250ml容量瓶、移液枪、胶头滴管、菜刀、吸球、电子天平、显微镜、盖玻片、载玻片、秒表

　　五、实验药品及试剂

　　0.17MNaCl、0.17MNH4Cl、0.17MNH4Ac、0.17MNaNO3、0.12MNa2SO4、0.12M草酸铵、0.32M葡萄糖、0.32M甘油、0.32M乙醇、0.32M丙酮、肝素抗凝剂

　　六、实验步骤

　　1、制备血液稀释液

　　（1）抗凝剂的制备：首先称取1克肝素钠粉末，然后加入0.17MNaCl溶液10ml（1∶10的比例），混合均匀，制成肝素抗凝剂。

　　（2）血液稀释液的制备：取新鲜血液，按比例（肝素抗凝剂:血液=1∶10）混合均匀，配制成经肝素抗凝的血液。

　　（3）按比例（经肝素抗凝的血液∶0.17MNaCl溶液=1∶10）混合均匀，形成一种不透明的红色液体。

　　2、低渗溶液（空白对照）的观察

　　取试管一只，加入10ml蒸馏水，然后再加入1ml稀释的血液。注意观察溶液颜色的变化。结果是溶液由不透明的红色变为澄清。记录下这个过程所要的时间。

　　3、红血球的渗透性

　　按表一的配制，分别在下列十种等渗溶液中进行实验。轻轻摇动，注意有无颜色变化，是否有溶血现象发生，记下时间（自加入稀释血液到溶液逐渐由红色变为透明澄清，红血球全部溶血所需时间），填入表一的空格中。

　　4、显微观察

　　何为细胞膜？注意：这一步，动作要非常迅速，否则鸡血会凝固。或者先把抗凝剂加入到烧杯中，再加入新鲜的鸡血，边加边震荡即可。为何不同物质进入细胞的速度不同？为什么新鲜的鸡血会凝固？何为溶血现象？为什么这一步要使用0.17M的NaCl溶液？你知道有哪些血液抗凝剂？

　　（1）血液红细胞的'观察

　　滴一滴稀释的血液于载玻片上，盖上盖玻片。用光学显微镜观察细胞的种类、形状和颜色。

　　（2）细胞破碎的观察

　　在上一步的载玻片的一端滴加清水，在另一端吸水，并在显微镜下观察细胞的破裂。

　　七、实验结果与分析

　　1、比较和分析你所观察到的实验结果，并解释原因。

　　结果：

　　（1）在所提供的试剂中不溶血的有：

　　（2）在所提供的试剂中不完全溶血的有：

　　（3）在所提供的试剂中完全溶血的有：

　　结果分析与比较：结论：

　　2、绘制你所观察到的血液细胞图。

　　3、讨论溶血实验在研究中应用的可能性。

　　细胞生物学实验报告 2

　　一、实验目的：

　　1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。

　　2、了解细胞凋亡的生物学意义

　　3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法

　　二、实验原理：

　　1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。

　　2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。

　　3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。

　　三、实验步骤：

　　细胞中过氧化物酶的显示

　　1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；

　　2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的`一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；

　　3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；

　　4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。

　　5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）

　　6、清水冲洗，番红复染2min。

　　7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100x）

　　细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:

　　1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)

　　2、生理盐水轻轻漂洗细胞

　　3、95%乙醇固定5min

　　4、PBS缓冲液洗2次

　　5、吉姆萨染色液染色5min

　　6、蒸馏水轻轻洗去染液

　　7、普通光学显微镜下观察。

　　吖啶橙染色:

　　1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)

　　2、生理盐水轻轻漂洗细胞

　　3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min

　　4、PBS缓冲液洗2次每次1min

　　5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液

　　6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。

　　四、结果与分析：

　　根据随机选择的几个视野的统计，该样品的细胞凋亡率=227/506x100=44.9

　　Hela细胞凋亡过程中核染色质的形态变化（吖啶橙染色）

　　五、思考题：

　　1、细胞凋亡的调控机制

　　细胞凋亡是一个受基因调控、众多细胞膜受体和胞浆蛋白参与的细胞主动自杀过程，其触发因素多种多样，包括细胞内诱导因子和抑制因子对细胞凋亡的调控。

　　2、细胞凋亡的特征

　　凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体。

　　3、研究细胞凋亡的方法

　　定性的研究方法：常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察（普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜）

　　定量或半定量的研究方法：各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。

　　细胞生物学实验报告 3

　　一、实验目的：

　　1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；

　　2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。

　　二、实验材料和仪器：

　　小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；

　　普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。

　　三、实验步骤：

　　(一)细胞形态观察

　　l、动物细胞的观察

　　（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。

　　（2）鸡血细胞涂片的'观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。

　　2、植物细胞的观察

　　取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。

　　（二）细胞的大小和测量

　　1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。

　　2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。

　　3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。

　　4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：

　　镜台测微尺的格数=目镜测微尺每格的微米数x 10/目镜测微尺的格数

　　四、实验结果：

　　1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24

　　2、细胞大小的测量：

　　五、作业与思考：

　　1、血细胞按含量高低，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。

　　白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：主要的功能是运送氧。白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血小板：止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。

　　2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。

　　3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。

　　细胞生物学实验报告 4

　　实验目的

　　1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。

　　2、了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。

　　3、学习细胞计数及营养液的配制。

　　实验原理

　　1、细胞原代培养

　　原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。

　　细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。

　　2、细胞死活鉴定死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的.差异。

　　染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。

　　死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：

　　死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。甲基蓝有类似的染色机理。植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。

　　死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。

　　除此之外，还有一些细胞器的专有染料。如液泡系的专有染料中性红。中性红是一种低毒性染料，可以使活细胞液泡着红色，而细胞质和细胞核不被着色；死细胞的液泡不被着色或浅染，染料弥散于整个细胞中，细胞核和细胞质被染成红色。有时侯为了增加染色效果可以将两种染料结合使用，如甲基蓝-中性红混合染色法。

　　实验用品

　　1、材料小白鼠

　　2、试剂

　　台盼蓝、伊红、PBS缓冲液、细胞培养液（含生长因子）

　　3、器材

　　剪子、棉球、75%酒精、移液枪、无菌操作台、正置光学显微镜、倒置光学显微镜、解剖盘、滴管、离心管、离心机、注射器、Eppendorf管、培养皿、酒精灯、塑料培养皿、载玻片、盖玻片、血细胞计数板

　　实验步骤

　　1、取材

　　取小鼠一只，采用断头法处死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min，取出转入超净工作台内的解剖盘中，无菌操作打开腹腔，取出其脾脏，除去其周围的脂肪组织，并用PBS液自上而下淋洗1-2次，转入无菌培养皿中待用。

　　2、分离脾细胞

　　用滴管向培养皿中注入30滴PBS缓冲液，再用“L”型针头注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾脏，注射时沿长轴注射。然后再用针头在脾脏上扎眼，并用“L”型针头轻轻刮出脾细胞。在均匀吹匀脾脏细胞。

　　吸取上述分离的单个脾细胞悬液，放入Eppendorf管中，使量至1mL，以1000r/min离心5min。3培养脾细胞

　　取塑料培养皿一套，用移液枪吸取培养液2mL加入塑料皿中，并将皿标记待用。取离心后的Eppendorf管，弃去上清液，用移液枪（200ul）吸取塑料皿中的培养液400ul加入弃去上清的Eppendorf管中，用枪头吹匀管底的脾细胞，吸取200ul脾细胞悬液接种于上述塑料皿中，混匀后放入37°C，5%CO2的培养箱中培养。

　　4、配制染液

　　用生理盐水配成5%台盼蓝染液，备用。

　　5、染色

　　取0.5mL细胞悬浊液放入试管中，加入1-2滴染液。混合。2-5min后将细胞放在血细胞计数板上观察死活情况，注意不要有

　　气泡产生，放大倍数为10x10。染色后活细胞不着色，死细胞显示蓝色。注意染色时间不能超过15min，否则染液将细胞毒杀。

　　6、计数

　　在10x10倍的显微镜下观察，计算血细胞计数板的4个4小方格的细胞数量。包括细胞总数与死细胞数量。压线者计上不计下，计左不计右。

　　7、计算细胞活力

　　根据公式：细胞活力=(总细胞数-死细胞数)/总细胞数x100%

　　实验结果

　　台盼蓝染色后的细胞（10x10）伊红染色后的细胞（10x10）

　　总细胞数和活细胞数统计表（10x10）