消瘤片水提工艺

时间：2022-10-06 00:00:04 本科毕业医学论文我要投稿

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消瘤片水提工艺

　　消瘤片水提工艺【1】

　　【摘要】目的优选消瘤片水提工艺。

　　方法以咖啡酸含量、总多糖含量和浸膏得率为指标，采用L9(34)正交设计试验，　对加水倍量、提取时间、提取次数等因素进行考察，以确定最优提取工艺。

　　结果较优工艺为加水14倍量，回流提取3次，每次1 h。

　　结论优选得到的消瘤片水提工艺稳定、可行。

　　【关键词】咖啡酸; 总多糖; 单因素实验; 正交试验

　　消瘤片为新疆医科大学附属中医医院妇科长期临床实践的经验方,其主要功效为活血化瘀、攻坚消瘤。

　　为方便患者使用，本课题组拟采用先进的技术和工艺，将其制成片剂-消瘤片。

　　根据各味药材的主要有效成分和理化性质，对方中蒲公英、茯苓等7味药用水提取，其中咖啡酸为蒲公英的主要有效成分，茯苓等药材主要含有多糖类成分。

　　因此，本研究以咖啡酸、多糖为主要评价指标，采用单因素及正交试验设计优选其水提工艺，现报道如下。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器Waters 2695高效液相色谱仪(美国Waters公司),Cintra20紫外可见分光光度计(GBC科技仪器有限公司),AL204电子天平、AG135电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]，SK3300LH超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，Direct QTM5超纯水仪(Millipore Corporation, Bedford, MA, U.S.A.)。

　　1.2试药咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110885-200102，供含量测定用)，葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110833-200503，供含量测定用)，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，试验中其它试剂均为分析纯。

　　茯苓、蒲公英等7味药材由新疆医科大学附属中医医院提供，经检验均符合《中国药典》2010年版一部项下规定。

　　2方法与结果

　　2.1HPLC法测定咖啡酸含量

　　2.1.1色谱条件色谱柱 SYMMETRY C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，流动相为甲醇-乙腈-0.4%磷酸(22∶2∶76)，检测波长323 nm，柱温30℃，流速1.0 ml/min，进样量15 μl。

　　2.1.2对照品溶液的制备精密称取咖啡酸对照品3.30 mg，加甲醇适量溶解并定容至 10 ml量瓶中,定容至刻度，摇匀。

　　精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。

　　再精密吸取2 ml置25 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀,作为贮备液。

　　2.1.3供试品溶液的制备及测定称取该处方各味药材适量，加一定量水回流提取一定时间，待药液冷却至室温后滤过，精密移取4 ml置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，离心，取上清液经微孔滤膜(0.45 μm)过滤后，取15 μl注入高效液相色谱仪测定，供试品溶液高效液相色谱图见图1。

　　图1供试品溶液高效液相色谱图

　　2.1.4标准曲线的绘制分别精密吸取贮备液1、2、3、4、5 ml，置于5 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得标准溶液。

　　取上述5个标准溶液，分别用微孔滤膜(0.45 μm)过滤后，各取15 μl注入高效液相色谱仪测定。

　　以峰面积积分值(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标进行回归，得回归方程为：Y =79 202 X-8 895.9,相关系数r=0.999 2。

　　结果显示咖啡酸在0.528～2.64 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

　　对照品溶液高效液相色谱图见图2。

　　图2对照品溶液高效液相色谱图

　　2.1.5日内、日间精密度试验取同一对照品溶液15 μl在同一天内重复进样5次，并连续测定5 d，计算日内及日间精密度。

　　结果日内精密度RSD=0.78%，日间精密度RSD=1.64%，表明本方法精密度良好。

　　2.1.6稳定性试验取同一供试品溶液15 μl，按0、2、4、6、12、24、48 h 间隔进样。

　　测得咖啡酸的峰面积RSD=0.83%，表明供试品溶液在室温下放置48 h内稳定。

　　2.1.7重复性试验取供试品6份，按2.1.3项下方法制备供试液，分别精密吸取15 μl进样，测定峰面积。

　　结果RSD=1.73%。

　　表明该方法重复性良好。

　　2.1.8加样回收率试验取2.1.3项下一定量经测定已知含量的供试品溶液，加入不同量的咖啡酸对照品溶液，制备成　高、中、低浓度的各3份样品，按2.1.1项下色谱条件进行含量测定。

　　结果平均加样回收率为100.34%，RSD=1.17%(n=9)。

　　2.1.9阴性对照试验精密称取处方中水提部分除蒲公英外的6味药材，按照2.1.3项下的方法制备缺蒲公英的阴性对照　溶液。

　　用高效液相色谱法测定，进样量15 μl。

　　结果表明，消瘤片处方中水提部分中其余药材对咖啡酸的含量测定无干扰。

　　阴性对照溶液高效液相色谱图见图3。

　　图3阴性对照溶液高效液相色谱图

　　2.2紫外可见分光光度法测定总多糖含量

　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品11.32 mg至10 ml量瓶中，加水定容至刻度，摇　匀。

　　再取2.5 ml置25 ml量瓶中，加水定容至刻度摇匀，得浓度为 0.113 2 mg/ml 的葡萄糖标准品储备液。

　　2.2.2供试品溶液的制备方法称取处方中水提药材，加适量水加热回流一定时间，精密移取滤液1 ml置100 ml量瓶中，定容至刻度，即得。

　　2.2.3最大吸收波长的测定精密吸取葡萄糖标准品储备液和2.2.2项下样品溶液各0.4 ml于10 ml具塞试管中，加水至2　　ml，分别加入1 ml 5%苯酚溶液和5 ml浓硫酸，迅速摇匀，放置5 min，置沸水浴中加热20 min，取出迅速冷却至室温。

　　另取2.0 ml蒸馏水同前加入试剂操作，作空白对照，在400～800 nm波长处扫描。

　　结果显示葡萄糖对照品溶液和供试品溶液经显色后均在487 nm处有最大吸收。

　　2.2.4标准曲线的制备精密吸取葡萄糖标准品储备液各0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml于10 ml具塞试管中，同2.2.3项下操作，测定吸收值。

　　以吸光度(Y)对葡萄糖浓度(X)进行回归分析，得标准曲线：Y=0.011 1 X-0.015，r=0.9955，表明葡萄糖浓度在22.64～67.92 μg/ml范围内呈现良好的线形关系。

　　2.2.5精密度试验同时精密吸取2.2.2项下供试品溶液2 ml、标准品储备液 0.4 ml，照2.2.3项下操作，连续测定5次吸收值。

　　结果供试品及标准品RSD分别为0.11%、0.16%，表明本方法精密度良好。

　　2.2.6稳定性试验精密吸取2.2.2项下供试品溶液2 ml，照2.2.3项下操作，显色后放置30、45、60、85、100、125、150、180、240 min时分别测定吸光度。

　　对4 h内显色稳定性进行了考察。

　　测定结果RSD=1.98%，表明供试品溶液显色后在4 h内吸光度稳定。

　　2.2.7重复性试验精密吸取2.2.2项下供试品溶液2 ml，共6份，测定吸收值。

　　结果RSD=2.49%，表明该法重复性良好。

　　2.2.8加样回收率试验取2.2.2项下经测定已知含量的供试品溶液0.3 ml，加入不同量的葡萄糖标准品溶液，制备成高、中、低浓度的各3份样品，按2.2.3项下操作，测定吸光度。

　　结果平均加样回收率为100.44%，RSD=2.61%(n=9)。

　　2.3提取工艺筛选[1-3]

　　2.3.1因素水平的确定以咖啡酸含量、总多糖含量及水提液的浸膏得率为考察指标，采用综合评分法，权重系数分别　为50、30、20，满分为100。

　　综合评分=(咖啡酸含量/最大咖啡酸含量)×50+(多糖含量/ 最大多糖含量)×30+(最小浸膏得率/浸膏得率)×20根据单因素实验结果，选择L9(34)正交表，进行正交试验设计，具体见表1。

　　表1因素水平表

　　2.3.2正交试验精密称取消瘤片处方中用水提取的药材，按以下正交试验表安排实验(每个实验同时做3个平行样)，分别测定咖啡酸含量、总多糖含量、浸膏得率，并进行综合评分。

　　直观分析结果可知，RC>RB>RA，即对提取影响大小顺序为C>B>A，最佳提取工艺为A3B3C3，见表2。

　　表2正交试验结果

　　2.3.3方差分析结果对正交试验结果进行方差分析，结果表明，提取次数对该方的提取效果有显著性影响(P<0.05)，提取时间和加水倍数对提取效果均无显著性影响。

　　结合工业大生产，从节约成本的角度考虑，确定较优提取工艺为A1B1C3，即14倍量水，回流提取3次，每次1 h，见表3。

　　表3方差分析

　　2.3.4验证试验精密称取处方中用水提取的药材3份，按A1B1C3回流提取得样品溶液，分别测定咖啡酸含量、总多糖含　　量、浸膏得率，并计算综合评分(表4)。

　　结果表明，本试验确定的消瘤片水提工艺稳定、可行、合理。

　　表4正交试验验证结果

　　3结论

　　3.1测定咖啡酸含量时，在确定供试品溶液的HPLC色谱条件时，考察了药典方法[4]、甲醇-水、甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水等，结果样品峰与杂质峰未能有效分离。

　　经反复试验，在流动相为甲醇-乙腈-0.4%磷酸(22∶2∶76)时，咖啡酸峰与其他组分色谱峰能较好地分离，空白对照亦无干扰，且峰形较好。

　　经方法学研究结果表明，本方法简便、准确、重复性好，可作为本方水提工艺中咖啡酸的含量测定用。

　　3.2咖啡酸、多糖为本方的主要有效成分，根据它们对疗效的影响程度，确定咖啡酸权重系数为50，多糖权重系数为　30，并确定浸膏得率权重系数为20，满分为100。

　　3.3本试验采用单因素试验及正交设计试验，经验证试验最终确定14倍量水，回流提取3次，每次1 h的方法为最优工　　艺。

　　优选得到的消瘤片水提工艺简易、稳定、可行，为工业化生产提供了一定的依据。

　　【参考文献】

　　[1]谭红胜,夏兴华,楚生辉.正交试验法优选蒲公英水提工艺[J].中药材,2004,27(3):211-212.

　　[2]钟世红,卫莹芳,古锐,等.苯酚-硫酸比色法测定红毛五加皮多糖的含量[J].时珍国医国药,2010,21(2):266-267.

　　[3]张西如,姜建国.正交试验研究蒲公英注射液的提取工艺[J].中成药,2007,29(7):1075-1077.

　　[4]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2010:331.

　　宫瘤消片提取工艺【2】

　　[摘要] 目的：确定宫瘤消片最佳水提取工艺,为该制剂开发成中药新药提供依据。

　　方法：以芍药苷的提取量和浸膏得率作为评价指标，采用正交试验优选仙鹤草、牡蛎、土鳖子、党参、白术、吴茱萸、白花蛇舌草水提方法。

　　结果：取其白花蛇舌草等七味加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.5 h;第2次加10倍量水，煎煮1 h。

　　结论：本法经济、合理、可行。

　　[关键词] 宫瘤消片;芍药苷;提取方法;正交试验

　　子宫肌瘤是女性生殖器官最常见的良性肿瘤，由平滑肌和结缔组织组成，故又称子宫平滑肌瘤。

　　常见于30～50岁妇女，40～50岁为高峰年龄组，20岁以下少见。

　　目前对于子宫肌瘤的治疗方法，仍以子宫切除术占首位。

　　因此，对于未婚、未育及希望保留正常月经功能者，具有抗感染作用的口腔药物的研制一直受到人们的广泛重视。

　　宫瘤消片是以牡丹皮、香附(制)、三棱、莪术、仙鹤草、牡蛎、土鳖子、党参、白术、吴茱萸、白花蛇舌草经提取制成的中药制剂。

　　本文以芍药苷的含量和浸膏得率为指标，采用正交试验法优选宫瘤消片的最佳水提方法，为该制剂开发成中药新药提供实验依据[1-2]。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国)：Agilent 1100泵、Agilent 1100 DAD检测器、Agilent 1100色谱工作站;Sartorius BP211D电子天平(感量0.l mg、0.0l mg);USC-502超声波清洗器。

　　1.2试药

　　芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736-200526);宫瘤消片(自制)，甲醇(色谱纯，天津市四有生物医学技术有限公司)，乙腈(色谱纯，天津市四有生物医学技术有限公司)，其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 方法学考察

　　2.1.1 色谱条件

　　试验参照国家食品药品监督管理局宫瘤消胶囊标准，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1% 磷酸溶液(15∶85)为流动相;检测波长：230 nm。

　　流速：1.0 ml/min，柱温：30℃，以Agilent-C18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)为分析柱，进行试验研究，结果芍药苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离，芍药苷与其相邻色谱的分离度大于1.5;按芍药苷峰计算，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。

　　2.1.2 对照品溶液的制备

　　取芍药苷对照品适量，用甲醇溶解并制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。

　　2.1.3 供试品溶液的制备

　　取本品10片，研细，取1.163 9 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20 ml，密塞，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.1.4 线性关系考察

　　分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μl，按正文色谱条件进行分析，测定峰面积，结果见表1。

　　以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，结果表明芍药苷进样量在0.2～1.0 μg范围内，呈良好的线性关系。

　　回归方程为Y=1 050.2X+44.93(r=0.999 2)，见图1。

　　表 1 标准曲线测定结果

　　Tab.1 The result of standardized curve

　　图1 标准曲线

　　Fig.1 Standardized curve

　　2.1.5 精密度试验

　　取本品(批号：050601)20片，研细，称取粉末1.163 g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μl，连续进样5次，供试品峰面积平均值为336.88，RSD=1.42%，结果表明精密度良好。

　　2.1.6 重复性试验

　　取本品(批号：050601)20片，研细，称取5份，各1.163 g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，测定色谱峰面积，含量平均值为0.486 7 mg/g，RSD=1.29%，结果表明重复性良好。

　　2.1.7 稳定性试验

　　取本品(批号：050601)20片，研细，称取粉末1.163 g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，分别在制备样品后的0、2、4、8，12 h进样测定，测得芍药苷峰面积的平均值为330.46，RSD=1.21%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定。

　　2.1.8 回收率试验

　　精密称取已知含量的样品(批号：050601，含量：0.553 8 mg/g)5份，分别精密加入对照品溶液1 ml，浓度为0.1 mg/ml，按上述条件依法测定。

　　本法平均回收率为99.26%，RSD=1.65%，表明回收率的重现性较好。

　　结果见表2。

　　2.1.9 样品含量测定

　　按上述芍药苷测定方法对十批中试及试生产成品的芍药苷含量进行了测定，每批平行测定2次，结果见表3。

　　表 3 样品含量测定结果

　　Tab.3 Content determination results of samples

　　2.2 提取方法的筛选

　　2.2.1 因素水平的确定

　　以芍药苷含量和出膏率为指标，重点考察提取溶媒的用量、提取次数和提取时间3个因素，每个因素选择3个水平，按L9(34)正交表设计试验。

　　因素水平见表4。

　　表 4 因素水平表

　　Tab.4 Factors level table

　　2.2.2考察指标的测定

　　2.2.2.1 芍药苷的含量测定精密量取样品液2 ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇20 ml，按上述方法测定。

　　2.2.2.2 出膏率的测定精密量取样品液20 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，照干燥失重法(《中国药典》2005年版一部附录Ⅸ G)测定。

　　2.2.3正交试验设计及方差分析

　　见表5～8。

　　2.2.4小结

　　上述方差分析结果表明，以芍药苷提取量为考察指标，因素A无显著性差异(P>0.10)，因素B无显著性差异(P>0.10)，因素C有显著性差异(P<0.05)，根据直观分析结果，最佳水提取工艺为A3B3C3。

　　以出膏率为考察指标，因素A无显著性差异(P>0.10)，因素B无显著性差异(P>0.10)，因素C有显著性差异(P<0.05)，根据直观分析结果，最佳水提取工艺为A3B3C3。

　　综合上述两方面结果，最佳水提取工艺为A3B3C3，即本品的最佳提取工艺为：取其白花蛇舌草等七味加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.5 h;第2次加10倍量水，煎煮1 h。

　　2.2.5 提取工艺验证

　　根据宫瘤消片提取工艺优选结果，连续投料三批，三批结果平行，说明提取工艺条件基本稳定。

　　结果见表9。

　　表 9 验证工艺

　　Tab.9 validation technology

　　3 讨论

　　本实验室对宫瘤消片中芍药苷的水提取方法进行了研究，实验中采用正交试验法，分别考察了加水量、提取时间、提取次数对芍药苷提取率和浸膏得率的影响。

　　浸膏是片剂中也是其他提取液中药物发挥疗效的物质基础，用它来比较提取工艺的优劣，虽然直观简便，但是杂质的浸出也会影响浸膏得率，而且并不能标志有效成分的量，故还选择了芍药苷作为考察指标，因为此药材中的芍药苷是抗菌的有效成分，对多种致病菌有较强的抑制和杀灭作用。

　　试验中发现，药材加热时间不宜过长，且要减压干燥。

　　最后得出提取的优选条件为A3B3C3，即药材用水提取2次，第1次加12倍量水，煎煮1.5 h;第2次加10倍量水，煎煮1 h。

　　提取工艺是现代制备工艺的关键和重点，而采用正交试验优选提取工艺时，评价标准的选定，即用什么指标才能真正评价出工艺的优劣又是难点。

　　在本实验中，采用浸膏得率、芍药苷含量2个指标进行评价，全面且具有代表性，较能客观内在地反映提取工艺的优劣。

　　[参考文献]

　　[1]任仁安.中药鉴定学[M].上海:上海科学技术出版社,1986:491.

　　[2]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2000:1231.

　　[3]国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编:中成药地方标准上升国家标准部分[C].口腔肿瘤:儿科分册,2002:391.

　　[4]刘芳,杨广德.白芍中芍药苷的提取方法研究[J].中成药,2003,25(10):792-795.

　　[5]张云升,和健等.牡丹皮中丹皮酚的提取工艺研究[J].河北省科学院学报,2005,22(3):49-51.

　　[6]陈亚林.正交试验法优选吴茱萸提取工艺的研究[J].国医论坛,2004,19(3):42-43.

　　[7]刘春美,徐春梅.牡蛎软体活性物质提取工艺的研究[J].药学实践杂志,2005,23(2):84-85,108.

　　[8]方桂珍,王洪江,苏文强.仙鹤草药用成分浸提工艺优选[J].东北林业大学学报,2002,30(1):36-39

　　活血通痹片水提醇沉工艺【3】

　　摘要　目的：筛选并优化活血通痹片提取醇沉工艺。

　　方法：以干膏得率和提取物中芍药苷含量为考察指标，采用正交设计多指标综合评分法优化提取工艺。

　　单因素考察不同醇沉浓度对芍药苷保留率的影响。

　　结果：通过正交试验优化确定的提取条件为：药材饮片第一次以10倍水，第二次8倍，提取2次，每次90min。

　　醇沉浓度为70%。

　　结论：该制备工艺合理，有效成分保留率高。

　　关键词　芍药苷

　　活血通痹片是广东第二中医院院内制剂，由桃仁、红花、赤芍等十三味药组成，具有补肾、活血化瘀、除湿通络等功效，主治肾虚血瘀所致腰膝疼痛，腰肌劳损，肢节屈伸不利等病症。

　　赤芍为毛茛科植物芍药Paceonia lacti flora Pall.的干燥根。

　　赤芍作为本方臣药，具清热凉血，散瘀止痛之功效。

　　因此，将赤芍中芍药苷含量作为指标性成分，结合提取工艺浸膏得率为考察指标，采用正交试验设计对其提取条件优选，采用单因素考察法对醇沉工艺进行优化，为生产工艺参数的确定提供依据。

　　1　仪器与试药

　　Agilent 1200高效液相色谱仪：G1316A检测器、G1312A二元泵、G1329A柱温箱、G2170A数据处理系统(Agilent，美国);XS2055分析天平(梅特勒，瑞士)，药材饮片(广州致信药业有限公司，批号20100206)，芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736-200901)，水为超纯水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

　　2　方法与结果

　　2，1　干膏得率的测定方法　取各正交实验号浓缩液10ml于干燥蒸发皿中水浴蒸干，照干燥失重测定法(中国药典2010年版一部附录IXG)测定，计算干膏得率。

　　2，2　芍药苷含量测定

　　2，2，1　对照品制备：利用分析天平精密称取已干燥的芍药苷对照品5.12mg，置于50ml容量瓶，甲醇溶解定容至50ml，即芍药苷为0.1024mg/ml。

　　2，2，2　样品制备及测定：取各正交实验号浓缩液5ml，置干燥蒸发皿中80℃水浴蒸干，甲醇溶解定容至50ml。

　　同法制备阴性样品。

　　2，2，3　色谱条件：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6×150mm，5μm);流动相：甲醇：0.1%磷酸水(14：86);检测波长230nm，柱温25℃。

　　将芍药苷对照品分别进样，2、3、4、6、8、10μl，由图1芍药苷在该色谱条件下峰形良好，其中芍药苷在204.8～1024ng范围内线性关系良好，回归方程为：峰面积Y=1.57942389X-2.6122678，r=0.99995(见图2)将阴性样品和待测样品进样检测，结果表明，阴性样品色谱在芍药苷相应的保留时间上无色谱峰(见图3)，样品中芍药苷色谱峰分离度良好(图4)。

　　2，2　吸水率考察　按处方称取的药材，加10倍量的水浸泡，每隔1个小时观察一次浸透心情况，直至药材全部浸透，滤过，量取滤液体积，计算药材吸水率，求得药材吸水率为192.3%。

　　2，3　正交设计优选提工艺　活血通痹片采用水煎煮提取工艺，在单因素试验考察的基础上，采用正交试验优化提取工艺，选取加水量(A)，提取次数(B)，提取时间(c)，作为考察因素，各取三水平，进行L9(34)正交试验，筛选最佳工艺条件，因素水平表见表1。

　　赤芍作为方中臣药，芍药苷为其主要成分，本试验以高效液相法测定提取液中芍药苷的含量，作为评价指标之一，权重系数定为0.6;而作为有效成分煎出间接控制的一个指标，药效物质提取的多少以干膏得率为考察指标，权重系数定为0.4，以两指标的结果进行综合评分。

　　试验时按处方量称取药材、饮片，按正交试验设计各实验号进行提取，滤过，滤液减压浓缩，定容至200ml，备用。

　　分别按2.2项下方法测定干膏得率、芍药苷含量，采用以下公式：

　　Y=(40/得膏率max)×得膏率+(60/(芍药苷含量)max)×(芍药苷)含量

　　进行综合评分，用SPSS11.0统计软件进行数据处理，对评分结果作直观分析和方差分析，以判断各因素对提取效果的影响程度，筛选出在该试验条件下最优的提取条件，试验安排及结果见表2，方差分析结果见表3。

　　由直观分析可知，影响提取工艺效果的因素顺序为：提取时间(B)>提取次数(c)>加水量(A)，最佳工艺组合为A283C2。

　　方差分析结果显示，提取次数和提取时间均对提取结果具有显著性影响，而加水量对试验结果的影响无显著性影响。

　　由于处方药材吸水率为192.3%，综合考虑缩短生产周期，降低生产成本等综合因素，选择第一次加水10倍量，第二次加水8倍，提取2次，每次提取90min作为水提取工艺参数。

　　2，4　验证实验　为确定该工艺条件的稳定性，以筛选的最佳条件，验证3批，结果见表4。

　　验证试验结果与正交试验优选结果吻合，表明正交试验优选确定的工艺条件合理、稳定、可行。

　　2，5　醇沉工艺优选　中药提取液一般体积较大，一般需进一步分离和精制。

　　药材的水提取药液常用醇沉方法，以除去杂质，从而达到减少服用量，提高药物稳定性的目的。

　　考虑本活血通痹复方制剂最后制备成片剂，载药量小，所以对所得中药提取液进行醇沉精制，除去蛋白质、鞣质等杂质，进一步增大载药量。

　　由于不同醇沉浓度除杂效果和有效成分保留率不一，故采用单因素考察法，以芍药苷保留率为指标，考察不同醇沉浓度对醇沉效果的影响。

　　芍药苷保留率计算方法如下：

　　芍药苷保留率(%)=醇沉前芍药苷含量/醇沉后上清液芍药苷含量×100%

　　按处方比例称取药材4份，根据提取工艺试验结果，第一次加水10倍，第二次加水8倍，提取2次，各1.5h。

　　提取完成后浓缩定容至200ml(相对密度1.08～1.10)，分别按下表加入乙醇至相应醇沉浓度，醇沉静置过夜24h，取上清液，回收乙醇，浓缩定容至200ml，按2.2项下测定芍药苷含量。

　　由表5可知，当随着醇沉乙醇浓度的加大，芍药苷保留率不断提高，醇沉浓度为70%时，芍药苷保留率可达95%以上，因此，确定活血通痹片的醇沉工艺为浓缩至相对密度1.08～1.10后，加乙醇至70%醇沉，静置过夜，取上清液，回收乙醇，浓缩，即得。

　　3　讨论

　　中药复方提取效果直接关系到产品的质量和疗效，选择评价提取工艺优劣的评价指标是研究工作中的重要问题，合理的提取工艺评价指标应该是提取的有效成分质和量的代表，也是提取物临床作用性质和强度的代表。

　　本文选取了方中臣药芍药中主要成分芍药苷的含量以及得膏率二者综合评分作为考察指标，确定提取工艺为第一次加水10倍，第二次加水8倍，提取2次，各1.5h。

　　确定醇沉工艺为提取完成后，浓缩至含生药1g/ml(相对密度1.08～1.10)，加乙醇至含醇量为70%，芍药苷保留率可达95%以上。

　　活血通痹片是在依据传统中医理论，结合目前药理研究的基础上化裁而来。

　　为了使其复合功效得到良好发挥，根据处方所含有效成分，在制定制备工艺路线时采取分步考察，以期达到对本方中脂溶性和水溶性有效成分最大限度的提取目的。

　　本实验对水提醇沉工艺进行了初步探讨，其他部分有待于进一步完善报道。

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