疣清颗粒质量标准研究

疣清颗粒质量标准研究

　　一篇毕业论文虽然不能全面地反映出一个人的才华，也不一定能对社会直接带来巨大的效益，对专业产生开拓性的影响。但是，实践证明，撰写毕业论文是提高教学质量的重要环节，是保证出好人才的重要措施。

　　【摘要】 目的 建立疣清颗粒质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对制剂中香附、白芍进行定性鉴别;对组方中有效成分黄芪甲苷用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法(RP-HPLC-ELSD)进行定量分析。结果 薄层色谱中斑点清晰,易于识别;RP-HPLC-ELSD法精密度、重现性良好,黄芪甲苷在1.032～5.16 μg范围内具有较好的线性关系,平均加样回收率为99.051 6%,RSD=1.05%。结论 在本研究基础上制定的质量标准可以控制本品的内在质量,方法是可行的。

　　【关键词】 疣清颗粒;黄芪甲苷;反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法;薄层色谱法

　　疣清颗粒由黄芪、白芍、香附、薏苡仁等药物组成,具有清热解毒、托毒排脓、敛疮生肌功效,主要用于治疗尖锐湿疣等皮肤病。本试验采用薄层色谱法对方中黄芪、香附、白芍进行薄层鉴别。黄芪是方中主药,因此,选定黄芪甲苷为该制剂的含量测定项目,采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法(RP-HPLC-ELSD)进行检测,以制定该制剂的质量控制标准。

　　1 仪器、试剂与药品

　　日本岛津HW-2000高效液相色谱仪(日本岛津公司);KQ-500E型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司);TD5A低速台式离心机(长沙湘仪离心机有限公司);AY220电子天平(岛津);Lichropher C18(5 μm,4.6 mm ID×15 cm)色谱柱(淮阴汉邦科技有限公司;硅胶G(青岛海洋化工厂)。

　　黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为110781-200511)。黄芪、白芍、薏苡仁、香附等药材购自辽宁省药材公司,经鉴定,符合2005年版《中华人民共和国药典》(一部)有关标准。疣清颗粒样品自制,批号为060611,060613, 060615。甲醇为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 薄层色谱鉴别

　　2.1.1 白芍 [1]

　　取本品3 g,加乙醇10 mL,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取白芍对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。再取除白芍外的其它处方量药材,按制备工艺制成缺白芍的阴性样品,取适量阴性样品同法制成缺白芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,分别吸取上述3种溶液10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-丙酮(8∶4∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。

　　2.1.2 香附[2]

　　取本品4.6 g,加温水(50 ℃)30 mL,超声处理10 min,水溶液用乙醚提取2次,每次30 mL,合并乙醚液,挥去乙醚,残渣加醋酸乙酯1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取香附对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。另按处方及工艺分别制备不含香附的阴性样品,同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲苯(3∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2,4-二硝基苯肼乙醇试液,放置1 h,斑点渐变为橙红色,而阴性对照液在相应位置上无此斑点。

　　2.2 黄芪甲苷的含量测定

　　2.2.1 色谱条件[3]

　　色谱柱为Lichrospher C18(5 μm,4.6 mm ID×15 cm,淮阴汉邦科技有限公司);流动相：甲醇-水(80∶20);流速：1 mL/min;柱温：25 ℃。ELSD检测温度：92 ℃;气体流量2.24 L/min。

　　2.2.2 对照品溶液的制备和线性关系的考察

　　精密称取黄芪甲苷对照品5.16 mg置于10 mL容量瓶中并定容至刻度,得到浓度为0.516 mg/mL的对照品溶液。分别取对照品溶液,用甲醇稀释成0.103 2、0.206 4、0.309 6、0.412 8、0.516 mg/mL黄芪甲苷溶液,按上述色谱条件测定。以黄芪甲苷的进样量常用对数为纵坐标,黄芪甲苷的峰面积常用对数为横坐标,回归得标准曲线：logA=0.779 133logC+7.380 524,r=0.999 973。结果表明,黄芪甲苷的进样量在1.032～5.16 μg范围内,与其峰面积有良好的线性关系。

　　2.2.3 供试品溶液的制备与测定

　　取疣清颗粒2.5 g,混匀,精密称定,置于锥形瓶中,加水50 mL,浸泡30 min,超声波处理30 min,放冷,用水饱和正丁醇萃取3次(40、40、30 mL),分取正丁醇层置于上述分液漏斗中,加入40%氨试液洗涤2次,每次40 mL,弃去氨试液,分取正丁醇提取液,水浴蒸干,残渣加蒸馏水3～5 mL溶解,放冷,通过D101大孔树脂柱(内径1.5 cm,长12 cm),以水50 mL洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30 mL洗脱,弃去40%乙醇洗脱液,继续用70%乙醇50 mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇转移并定容至5 mL容量瓶中。从该溶液中取一部分用0.45 μm微孔过滤器过滤后即得疣清颗粒供试品溶液。取上述供试品溶液10 μL注入液相色谱仪,测定峰面积。

　　2.2.4 精密度考察

　　按选定的黄芪甲苷HPLC测定条件,精密吸取同一对照品溶液,进样10 μL,重复进样6次,测定黄芪甲苷峰面积,结果RSD=1.19%(n=6)。

　　2.2.5 重复性试验

　　精确称取疣清颗粒2.5 g,共6份,按上述供试品溶液的制备方法制备,各进样10 μL,每份样品进2针,测定黄芪甲苷峰面积,RSD=0.92%(n=6)。

　　2.2.6 稳定性考察

　　将同一样品溶液,在0、2、8、12、16、20 h分别进样10 μL,记录峰面积,结果表明,峰面积的RSD=0.71%(n=6)。说明供试品溶液在20 h内是稳定的。

　　2.2.7 加样回收率试验

　　取已测知含量的样品适量,共6份,分别加入等同于样品中黄芪甲苷含量80%、100%、120%的黄芪甲苷对照品,按“2.2.3”项下同法测定,用外标两点法计算含量。结果见表1。表1 黄芪甲苷加样回收率测定结果(略)

　　2.2.8 含量测定

　　取疣清颗粒3批样品(自制,批号为060611、060613、060615),按供试品溶液制备方法制备样品液,按上述色谱条件进行测定,进样10 μL,每份重复进样2次,测定疣清颗粒中黄芪甲苷含量。结果见表2。表2 疣清颗粒样品含量测定结果(略)

　　3 讨论

　　疣清颗粒中白芍、香附薄层鉴别与阴性对照品相比无干扰,且重现性较好。香附薄层色谱鉴别参照有关文献报道,喷以2,4-二硝基苯肼乙醇试液,放置片刻后斑点显现不明显,根据试验结果,需放置1 h后斑点渐显,且在较长时间内斑点明显,不褪色。黄芪甲苷含量测定方法已报道有比色法、薄层扫描法、HPLC法等,其中HPLC法大多用紫外检测器于203 nm处检测。在预试验中,曾使用紫外检测器检测,结果干扰较大,基线漂移严重,测定结果不稳定,而改用RP-HPLC-ELSD进行检测,空白无干扰,结果准确可靠,重现性好,适合于疣清颗粒的质量控制。

　　【参考文献】

　　[1] 郭 炜,袁志芳,张兰桐.归芍软胶囊质量标准研究[J].中成药,2006, 28(3)：351.

　　[2] 覃金玲,廖建维,冯灵平,等.逍遥妇乐颗粒质量标准研究[J].中药新药与临床药理,2006,17(2)：127.

　　[3] 黎俊华.复方止血颗粒的质量标准研究[J].中国药房,2006,17(8)：615.

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