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小针刀对兔骨折愈合影响的实验研究论文
目的 探讨小针刀对骨折愈合的影响及其作用机制。方法 取健康日本大耳白兔72只，造模后随机分为实验组、空白对照组及干扰电流治疗组；实验组于术后第3天开始小针刀刺激骨折断端，每周2次；空白组不做任何治疗；干扰电疗组于术后第1天开始每天行电刺激治疗。术后7、14、28、42 d行常规X线摄片和组织学检查。结果 从X线片、组织学检查显示，小针刀治疗组的骨痂形成速度、骨愈合成熟程度均优于空白对照组，但与干扰电疗组无明显差异。结论 小针刀治疗可促进兔骨折愈合。〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To explore the effect and mechanism of small-needle-knife therapy for fracture coalescence. Methods Seventy-two rabbits were randomly divided into three groups as follows：experimental group, stimulating the broken end of the fracture by small-needle-knife at 3rd day after operation, two times a week; the control group accepted no treatment，and the electro-therapy group, electro-stimulating begin at 1st day after operation, one time a day. X-ray films and histological examination were made at 7th, 14th, 28th and 42nd day after operation. Results Both histological and X-ray examinations showed that the velocity of callus formation and qualities of healing process in the experimental group were significantly better than these in control group, and were not obvious difference compared with electro-therapy group. Conclusion The therapy of small-needle-knife can promote fracture coalescence in rabbits.
〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 fracture-coalescence; small-needle-knife therapy; interference current; Healing process; rabbits格证号：SYXK(湘)2003-0001。
1.1.2 仪器 东方红F30-IIF200maxX线摄片机（北京医用射线机厂生产）；AO-820组织切片机（美国生产）；400倍奥林巴斯光学显微镜（日本生产）；小针刀为汉章牌（北京华夏针刀医疗器械厂）；自制手锯；刺激器为调制成具有特定生理强度的干扰电流(自行设计)，其电学参数为8.0 v，电流为9 mA，频率恒定在4 000 Hz，电极用薄银片制成，大小为4 mm×8 mm，电极的一端焊有15 cm的绝缘导线与刺激器连接。
1.1.3 试剂 乌拉坦、庆大霉素，均由湖南中医药大学动物实验中心提供。
1.2 方法
1.2.1 模型制备 实验兔用25%乌拉坦4 mL/kg耳缘静脉麻醉后，常规右前腿剪毛、碘伏消毒，铺无菌单，无菌条件下切开皮肤，分离肌肉、血管、神经等，暴露桡骨，于其中部用自制手锯横向锯成3.0 mm的骨缺损骨折，骨折不固定，缝合皮肤，包扎伤口。术后庆大霉素4 mg/kg肌注3 d预防感染。
1.2.2 分组与饲养 造模后随机分成3组：实验组、空白对照组、干扰电流组，每组24只。所有兔子进行单笼并且统一由同一饲养员饲养。
1.2.3 处理 实验组术后第3天开始，在无菌条件下绕开皮肤切口以小针刀在骨折处前外侧用捣刺和骨膜刮动（每次每法治疗8下）进行刺激，每周2次，至第6周；空白对照组不做任何治疗，其它处理同另外两组；干扰电流组术后第1天开始以干扰电流在骨折断端远近两侧刺激兔子右前臂，1次/d，40 min/次。
1.2.4 外骨痂与骨折线评分及标本采集 分别于术后第7、14、28、42 d分别处死各组中的6只兔，拍摄X线片后取骨折局部组织，10%福尔马林固定，乙酸脱钙，常规制成脱钙石蜡切片，HE染色观察。X线读片采用盲法，评价两项参数根据骨折愈合过程中外骨痂和骨折线的变化规律，将外骨痂和骨折线进行如下半定量[1]：（1）外骨痂可定量为：0分：外骨膜无反应；1分：外骨膜出现了反应；2分：外骨痂大小或密度较前明显提高；3分：外骨痂连在一起形成皮质骨桥；4分：外骨痂轻度吸收；5分：外骨痂明显吸收；6分：外骨痂接近完全吸收，骨折处皮质骨密度接近正常皮质骨；（2）骨折线可定量为：0分：骨折线清晰无变化；2分：骨折线开始变模糊；4分：骨折线模糊未消失，但出现较牢固的连接迹象；6分：骨折线已消失，骨折线被高密度的骨痂取代；8分：骨髓腔密度开始减低；10分：骨髓腔处密度明显减低；12分：骨髓腔完全再通，将上述两侧外骨痂和骨折线参数评分相加即为骨折愈合的X线评分。
1.2.5 统计学分析 各组数据以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，组间比较用完全随机设计方差分析，使用SPSS11.5进行统计分析。
2 结果
2.1 一般情况观察
术后动物精神状态、食欲及活动均良好，伤口愈合良好，无死亡，小针刀及干扰电流治疗顺利。
2.2 小针刀对兔骨折外骨痂与骨折线X线片的影响
实验组7 d（图1①），骨折线模糊，骨膜反应明显，部分可见少量外骨痂； 14 d（图1④），外骨痂量较多，骨折间隙密度增高，部分骨折线呈现较牢固连接迹象； 28 d（图1⑤），外骨痂开始吸收，骨折线消失，被高密度的骨痂取代； 42 d（图1⑥），外骨痂明显吸收，骨折处皮质骨密度接近正常皮质骨，骨髓腔完全再通。空白对照组7 d（图1①），骨折线清晰，骨膜反应轻；14 d（图1③），骨折线模糊，出现少量外骨痂，骨折线尚未出现牢固连接迹象；28 d，大量的外骨痂，骨折线出现牢固连接迹象，但外骨痂无吸收；42 d，骨折线消失，外骨痂开始吸收，髓腔未再通。干扰电流组照片情况和实验组大致相同。3组参数总的评分实验组和空白对照组有明显的差异（P<0.05），但实验组与干扰电疗组无明显差异(P>0.05)。见表1。
2.3 组织学检查
３组动物的骨折愈合都经历了血肿机化、纤维性骨痂、软骨性骨痂、骨性骨痂４个病理阶段。7 d：实验组骨折断端间血肿被肉芽组织取代，大部分已经机化形成纤维组织连接，骨内外膜骨样组织增生；空白对照组，肉芽组织少，机化较差，血肿仍存在，断端骨内外膜软骨初现（图2①）；干扰电疗组骨折断端血肿被肉芽组织取代，较多的纤维组织连接，骨内外膜骨样组织增生活跃。14 d：实验组和干扰电流组骨折断端间纤维骨痂明显减少，软骨骨痂明显增多，边缘出现了钙化和骨化，骨外膜增生明显，出现大量软骨性骨痂并且出现部分骨小梁（图2②）；空白对照组骨折断端主要以纤维骨痂为主，部分肉芽组织尚未完全被纤维组织取代，内外骨痂少，外骨痂较前两组薄。28 d：实验组骨折断端可见大量骨小梁，并且骨小梁排列有一定方向性，且较规则，骨小梁周围出现一层排列整齐的骨母细胞，周边炎症细胞消失（图2④）；空白对照组断端骨痂中仍有纤维组织和软骨化骨成分，炎症细胞仍然存在（图2③）。42 d：实验组骨小梁似正常大小、排列规则，髓腔改建基本完成，髓腔再通（图2⑥）；空白对照组出现大量骨小梁，但外骨痂尚未完全桥接，骨折端外骨痂中嵌有部分纤维软骨，髓腔改建未完成，髓腔未再通（图2⑤）。
3 讨论
综合各项指标分析，小针刀治疗组骨折愈合情况在各个时相都优于空白对照组，特别是第14天有显著差异。但小针刀治疗与干扰电流治疗组无明显差异。
在X线片上，骨折线的模糊程度基本反应了骨痂变化，采取上述评分标准，半定量分析骨折愈合情况，外骨痂评分说明骨外膜形成和塑性情况，骨折线模糊程度反应了骨痂形成及塑性变化。这个评分近似地反映骨折愈合过程的各个阶段变化，从而有利于比较各组骨折愈合程度。根据外骨痂及骨折线X线片评分，实验组愈合程度明显优于空白对照组（P<0.05），但和干扰电流组无明显差异。从影像上证明了小针刀治疗能加速骨痂形成与钙化，加快骨塑形，提高骨折愈合速度。
在组织学上骨折愈合都经历血肿机化、纤维性骨痂、软骨性骨痂、骨性骨痂4个病理阶段，通过对本次实验各个阶段组织切片的观察，实验组和干扰电流组都能较空白对照组提前机化血肿，纤维、软骨、骨性骨痂的生长情况都优于空白对照组，髓腔亦较后者提前再通。
小针刀作为一种物理刺激治疗手段，其促进骨折愈合的机制可能是：①促进局部血液及淋巴循环，以增加病灶部位的营养，也加快了坏死和瘢痕组织的吸收［2］。实验证实小针刀治疗组炎症消退时间，纤维性、软骨性、骨性骨痂及破骨细胞出现时间较空白对照组提前。②加强诱导成骨［3］，通过观察组织切片，小针刀治疗组骨膜下成骨优于空白对照组，部分X片（图2-6）显示：通过小针刀刺激骨膜外形成骨样赘生物。③通过对病变部位较强的刺激，以提高局部组织的兴奋性，调动机体生物能康复系统，促进组织修复［4］。实验证实小针刀治疗组动物活动性和食欲较空白对照组好。④调节内分泌系统，使机体各种激素分泌处于向机体有益的方向发展［5］。⑤小针刀作用被概括为“剥离粘连、疏通阻滞、流通气血、刮除疤痕、松解肌肉、镇惊止痛”［6］，组织切片证实：同时相小针刀治疗组血肿机化比空白对照组好，内外骨痂比空白对照组增多，骨痂吸收和髓腔再通时间亦较前者提前。
小针刀对骨折愈合的影响国内外尚未见相关报道，我们通过实验研究发现小针刀对新鲜骨折有一定疗效，同样也开辟了小针刀的新用途并且丰富了促进骨折愈合治疗的手段。
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