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HPLC法测定不同采收期小叶榕叶中异牡荆苷的含量论文
Abstract:Objective To develop a quantitative method to determine isovitexin in Folium Fici Microcarpae, and to compare the content of isovitexin in Folium Fici Microcarpae of different growth stages.Methods HPLC method was used by using MeOH?H2O (38∶62) as mobile phase. The detection wavelength was at 270 nm.Result The highest content of isovitexin from different growth stages was 0.69%, and the lowest was 0.18%. The contents in 7-12 moths were significantly higher than other months. Conclusion This method was simple, quick and accurate for determination of isovitexin in Folium Fici Microcarpae.Key words:HPLC; Folium Fici Microcarpae; isovitexin
小叶榕叶Folium Fici Microcarpae，又名小榕叶、落地金钱，来源于桑科榕属植物榕树（Ficus microcarpa L.f.）的叶。小叶榕叶为民间常用中草药，其味淡，性凉，具有清热发表、解毒消肿、祛湿止痛的功效［1］。用于治疗哮喘和慢性支气管炎，在治疗心血管疾病、抗炎、抑菌等方面也都有显著的效果［2］。其中主要含黄酮、三萜类和甾体化合物等化学成分［3］。小叶榕叶中的黄酮类成分主要为异牡荆苷（另文报道）。本实验采用HPLC法，建立了小叶榕叶中异牡荆苷的含量测定方法。该方法操作简便、快速、重现性好，适用于本品的质量控制。
1 仪器与试药
美国Waters高效液相色谱仪：Waters 600型泵，2487型紫外检测器，Empower工作站。赛多利斯电子天平。
小叶榕药材采自广州，在一年中各月份分别采集，所有样品由广东药学院房志坚副教授鉴定为桑科榕属植物小叶榕Ficus microcarpa L.f.的叶。对照品异牡荆苷为自制，经UV、氢谱、碳谱鉴定（另文报道），并利用HPLC归一化法分析其纯度达99.48%。甲醇（色谱纯，天津科密欧公司），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
Gracesmart C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇?水（体积比38∶62）；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：270 nm；进样量：20 μL。
2．2 对照品溶液的制备
取异牡荆苷对照品适量，精密称定，以体积分数50％甲醇溶解，配制成每1 mL含异牡荆苷21.6 μg的溶液，以此作为对照品溶液。
2．3 供试品溶液的制备
取本品粉末（过20目筛）约1 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入体积分数50％甲醇50 mL，称定重量，加热回流40 min，放冷，再称定重量，以体积分数50％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液10 mL，通过聚酰胺柱（60～80目聚酰胺约2 g，装于内径1.5 cm的小柱），以体积分数50％甲醇洗脱，洗脱液收集于100 mL量瓶，并以洗脱液定容至刻度，摇匀，即得。
2．4 线性关系考察
分别精密量取“2．2”项下对照品溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.5，5.0和10.0 mL置10 mL量瓶，加体积分数50%甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件进样，测定峰面积，分别为11 565、21 718、44 185、88 508、153 526、221 861、458 014，依峰面积（A）与质量浓度（ρ）绘制标准曲线，所得回归方程为A=21 171ρ-2 585.1，r=0.9996，表明异牡荆苷质量浓度在0.54～21.6 μg·mL-1范围内线性关系良好。
2．5 精密度试验
精密吸取对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积，求得RSD值为0.73％，表明精密度良好，结果见表1。
2．6 稳定性试验
对同一供试品溶液，分别于0，2，4，12，24 h进样，测定异牡荆苷峰面积，求得RSD值为1.84％，表明样品在24 h内稳定，结果见表1。
2．7 重复性试验
取同一批号样品5份，按供试品溶液制备方法平行处理，依法测定，求得RSD值为0.42％，表明重复性良好，结果见表1。表1 精密度、稳定性、重复性试验测定结果（略）
2．8 回收率试验
精密称取已知含量的样品数份，精密加入一定量的对照品溶液，依法测定，计算平均回收率为100.51％，RSD值为4.50％，结果见表2。表2 回收率试验测定结果（略）
2．9 样品含量测定
分别取不同采收期的样品按供试品溶液制备方法处理，依法测定，计算含量。结果见图1及表3。表3 不同月份小叶榕叶中异牡荆苷的含量（略）
3 讨 论
3．1 异牡荆苷为小叶榕叶中含量较高的黄酮类药效组分之一，故将其作为小叶榕叶质量评价的指标成分。异牡荆苷在270 nm处有最大吸收［4］，故选择该波长为测定的波长。实验曾比较不同比例的甲醇作为提取液，以体积分数50％甲醇的提取液峰面积较高，杂质较少，确定选用体积分数50％甲醇回流提取。提取液通过聚酰胺柱能有效去除杂质，减少对色谱柱的损害。
3．2 本试验考察了不同采收月份药材的情况，结果表明，小叶榕叶中异牡荆苷成分的含量在1～6月份较低，在7～12月份较高。该结果为小叶榕叶的合理采收和利用提供了理论依据。对于不同采收年限，不同产地的药材还有待于进一步考察。
3．3 本研究建立了小叶榕叶中异牡荆苷含量的测定方法。线性关系及重现性良好，方法稳定准确，可作为小叶榕叶的质量控制方法，为进一步研究其物质基础和作用机理打下了基础。
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