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简述6种抗菌药对鸡大肠杆菌病的疗效比较
摘 要：本次试验对从甘肃农业大学提供的鸡大肠杆菌菌种进行了体外抑菌试验，观察了硫酸多黏菌素、盐酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸诺氟沙星、硫酸庆大霉素、头孢拉啶对大肠杆菌的抑制效果。体外抑菌试验采用的是药敏试验的纸片扩散法，药敏试验结果显示硫酸多黏菌素和盐酸土霉素属于极度敏感，硫酸新霉素和乳酸诺氟沙星属于高度敏感，硫酸庆大霉素和头孢拉啶属于中度敏感。选取某养殖户健康鸡350羽，分为7组(其中一组为对照组)，分别用这6种药物进行治疗，6种药物中硫酸多黏菌素的疗效最好，治愈率达98 %，其他四种药物也有较好的疗效。通过本次试验为靖远地区鸡大肠杆菌病的防治用药提供参考。
关键词：大肠杆菌;药敏试验;抗菌药物;疗效
随着我国养禽业集约化的快速发展，禽类疾病也越来越频发。细菌性疾病呈现上升趋势[1-2]，大肠杆菌病已成为困扰养禽业主要的疾病之一。禽大肠杆菌病是由大肠杆菌的某些致病性菌株所引起的多种禽病的总称，其特征是引起鸡的心包炎、腹膜炎、关节炎、输卵管炎、大肠杆菌性肠炎、肉芽肿、败血症等症状[3]。例如鸡胚感染大肠杆菌后可导致鸡胚的死亡率升高、孵化率下降以及增加雏鸡发病死亡率。成年鸡感染大肠杆菌可增加死亡率，导致生长缓慢、饲料酬劳率降低。由于禽大肠杆菌抗原性比较复杂、临床病变表现复杂，所以当禽大肠杆菌病常与病毒性疾病和其他细菌性疾病并发或继发时，容易给养禽业带来十分大的危害。目前禽大肠杆菌病临床上一般已药物治疗为主[4-5]。但是，由于养殖过程中用药不科学、盲目的滥用抗菌类药物，使得细菌的耐药性理由逐渐的显现出来，由此造成的危害十分严重，不仅降低了抗菌药的疗效、延长治疗周期，而且增加了死亡率，给养禽业带来了巨大的经济损失。
1 试验材料
1.1 主要仪器与设备
托盘天平、电热恒温干燥箱、隔水式恒温培养箱、打孔器、无菌操作台、微量移液枪、试管、烧杯、锥形烧瓶、平皿、接种环、定性滤纸、打孔器。
1.2 试剂
琼脂、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、0.1 mol/L氢氧化钠溶液、纯化水、灭菌生理盐水。
1.3 药品
硫酸多黏菌素可溶性粉，批号20140301，规格：100 g/袋。由上海宏牧动物药业有限公司生产。盐酸土霉素可溶性粉，批号140702，规格：100 g/袋;由华北制药集团动物保健有限公司生产。硫酸新霉素可溶性粉，批号：140201，规格：100 g/袋;由华北制药集团动物保健有限公司生产。乳酸诺氟沙星可溶性粉，批号20140816，规格：100 g/袋;由北京华盛堂生物科技有限公司生产。硫酸庆大霉素可溶性粉，批号140102，规格：100 g/袋;由华北制药集团动物保健有限公司生产。头孢拉啶可溶性粉，批号20140906，规格：100 g/袋;由北京华盛堂生物科技有限公司生产。
1.4 试验动物
由靖远某鸡场提供33日龄健康三黄鸡350羽(均未使用过任何药物)，雌雄各半，体重相近，试验前观察一周，正常采食和饮水。
1.5 试验菌种
由甘肃农业大学动物医学院实验室提供。
2 试验策略
2.1 培养基的制备
根据《兽医微生物学实验指导》[6]，制备营养肉汤、伊红美蓝培养基，置于4 ℃冰箱保存备用。
2.1.1 菌种活化
将实验室提供的大肠杆菌接种于3 mL～5 mL经灭菌的试管肉汤中，置于37 ℃恒温箱，培养16 h～18 h。用灭菌接种环取出少量接种于伊红美蓝培养基，划线均匀，以获得单个菌落。
2.1.2 挑取单一菌落培养
用灭菌接种环在伊红美蓝培养基中挑取单一菌落接种于3 mL～5 mL经灭菌的试管肉汤中，置于37 ℃恒温箱，培养16 h～18 h。
2.2 药敏片的制备
2.2.1 药液的配制
因药物的浓度和剂量直接影响抑菌试验的结果，所以药品需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
2.2.2 药敏片的制备
参照《抗菌药物的药敏试验策略》中药敏纸片的制作策略[7]，将定性滤纸，用打孔机打成6 mm直径的圆形小纸片，每100片一组，并将其放入6个清洁干燥的无菌瓶中，用牛皮纸包扎瓶口。经121 ℃高压灭菌15 min后，放在37 ℃恒温箱中过夜，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01 mL计算，向小瓶内分别加入不同6种药液1 mL，不停翻动纸片，使纸片在药液中充分浸泡1 h，置于4 ℃冰箱内1 h～2 h。在分别放置在平皿中，烘箱烘干，4 ℃冰箱保存备用。
2.3 药敏试验
在超净台中，将稀释的菌液，置于琼脂平板表面，用已灭菌玻璃棒涂布均匀。在超净台中干燥5 min后，用无菌镊子将上述6种药敏试纸贴于琼脂平板表面，每种纸片贴3张，并轻压使其紧贴在平板表面，药敏试纸一旦接触平板就不要再轻易移动。各纸片中心距离应大于26 mm，需准确记录每种药敏片的名称，置于37 ℃温箱培养16 h～18 h，取出观察结果。
2.4 临床试验分组及用药
将养鸡场提供的350羽鸡随机分为7个组试验，每组50羽，雌雄各半，体重相近。用药组每羽试验鸡均口服大肠杆菌菌液0.6 mL，进行人工诱导感染。试验分组及用药情况见表1。
3 结果与分析
3.1 药敏试验
如表2所示，根据抑菌圈直径的大小，6种药物对大肠杆菌的敏感性依次为硫酸多黏菌素、盐酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸诺氟沙星、硫酸庆大霉素、头孢拉啶。根据美国NCCLS判定标准，硫酸多黏菌素和盐酸土霉素属于极度敏感，硫酸新霉素和乳酸诺氟沙星属于高度敏感，硫酸庆大霉素和头孢拉啶属于中度敏感。
3.2 临床治疗试验
6种抗菌药对鸡大肠杆菌病的治疗效果见表3。由表3可知，对350羽病鸡分别采用硫酸多黏菌素、盐酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸诺氟沙星、硫酸庆大霉素、头孢拉啶进行治疗，硫酸多黏菌素平均治愈率最高为98 %，其后依次为硫酸新霉素、乳酸诺氟沙星、硫酸庆大霉素和头孢拉啶。
4 讨论
4.1 自制药敏片的好处
本次试验采用的是靖远地区临床常用药物制成的药敏片。通过试验证明，应用自制的药敏纸片进行药敏试验，能做到灵活选药，与某病菌相关的药物均可随时制作成药敏纸片，可在当地范围内从常用的药品中筛选出最敏感的药物，并且可在短时间内确定最优药物和最佳剂量，既能及时治疗降低死亡率，又能避开盲目用药，减少浪费。
4.2 应用抗菌药必须有明确的临床指征
在选用抗菌药物对鸡大肠杆菌病进行治疗时，必须要有明确的临床指征作为依据。现阶段我国的鸡大肠杆菌病多以混合感染为主，但不同病原为主的混合感染表现的临床症状也不尽相同，在临床应用中应根据临床症状、病例剖检[8]，再结合实验室诊断结果进行综合判定，找出病原，根据病原选择最佳的药物进行治疗，切不能在不明病因的情形下盲目用药。
4.3 尽量做到根据药敏试验结果选药
鸡大肠杆菌主要通过呼吸道感染，并且容易产生耐药性。因此，在选用抗生素类药物治疗大肠杆菌病时必须具有针对性。如果条件允许，最好要对分离的病菌进行药敏试验，根据药敏试验结果针对性地选择药物，这样会起到药半功倍的效果[9-11]。
5 结论
本次试验将靖远地区的大肠杆菌，人工诱导健康鸡感染发病，通过临床疗效和实验室药敏试验，确定此次所选药品中的硫酸多黏菌素对治疗鸡大肠杆菌病的治疗效果显著，适用于靖远地区鸡大肠杆菌病的治疗。
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