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生物论文学术
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生物论文学术【1】
荔枝果肉多糖之分离纯化与结构表征、抗氧化活性研究
第一章 绪 论
1.1 引言
荔枝(Litchi chinensis Sonn)属无患子科，古称荔枝、离支、丽支，果实成熟时果皮红艳诱人，故又俗称丹荔;果肉(实际上是荔枝的假种皮)为白色、半透明、香甜多汁、柔软而脆[3]。
荔枝为广东四大名果之一，俗有“岭南果王”之称，具有较高的营养价值和多种滋补养颜效果，一直被视为“果中珍品”。
我国是世界上栽培荔枝最早的国家，已知有 100 多个品种。
目前，亚热带地区气候和土壤合适的地方都有荔枝种植[4]，我国荔枝栽培主要在广东、海南、广西、四川、福建、云南、台湾等省区。
在国外，越南、老挝、斯里兰卡、印度尼西亚、波多黎各、菲律宾、毛里求斯、马尔加什、南非、古巴等也产荔枝，但都是直接或间接从我国引入栽培的[5-6]。
2007 年广东荔枝种植面积 400 万亩，产量达到 96 万吨，2008 年种植面积 413 万亩，产量达到 91 万吨，产量占全国总产量的 60%，面积为全国种植面积的一半[7]。
但是荔枝不耐贮藏，采后短时间内极易发生褐变和腐烂变质，加之产量的大幅增加与贮藏、运输和市场方面的制约，往往造成大量鲜果因未及时处理而败坏，屡屡出现丰产不丰收的现象。
所以，开展荔枝精深加工，开发荔枝功能性食品已迫在眉睫，这对于提高广东省农业生产效率，推动荔枝产业的持续发展具有重要意义。
本章阐述了荔枝及荔枝果肉多糖研究现状、国内外多糖研究进展并简要介绍了本课题的研究意义和研究内容。
1.2 荔枝及荔枝果肉多糖的研究进展
荔枝具有很高的营养和药用价值，据《开宝本草》记载，荔枝可止渴、美容。
荔枝全身都可入药，荔枝树根(行气止痛、固肾涩精)、树皮(疏肝解郁、祛风健胃)、树枝(治虚喘)、叶(解暑消滞、收湿敛疮)、
花(治喉痹肿痛)、果壳(治血崩)、果核(行气散结、祛寒止痛) 均可药用，荔枝果肉则是岭南佳果之一，适量食用，有补脾、益肝、养血、悦颜之功效[8]。
结合本课题我们主要讨论有关荔枝果肉营养成分和果肉多糖功能的研究概况。
1.2.1 荔枝果肉营养成分
荔枝果实中含有大量的糖分、维生素C、磷、钙以及少量的蛋白质、脂肪、维生素B等营养物质，荔枝果肉中矿物质元素含量也较丰富。
研究认为荔枝中的酸主要是苹果酸、琥珀酸和柠檬酸[9]，而另有报道在荔枝果肉中采用相同的方法没有发现琥珀酸[10]。
荔枝果实的糖/酸比较高，存在品种差异，妃子笑为 65.7，糯米糍高达 92.3[10]。
Chyau等[11]发现荔枝果肉的香气成分由游离态和结合态两种形态组成，游离态气味成分主要有三羟基-2-丁酮(30.1%)，香叶醇(15.6%)等;结合态气味成分主要为香叶醇(73.7%)和香叶醛(7.95%)。
刑其毅等[12]用冷冻收集法收集到的荔枝果肉头香水溶液研究荔枝香味成分，鉴定出 34 种香味成分，主要成分有醋酸、异戊醇、醋酸甲酯等。
荔枝果肉含有丰富的蛋白质和氨基酸[13];荔枝汁中氨基酸种类齐全(17 种)、含量高，每 100mL含 136.44mg氨基酸，
除色氨酸外，含有人体所必需的 4 种氨基酸;总氨基酸中必需氨基酸的含量高达 44%，其中天冬氨酸、苏氨酸、丙氨酸、蛋氨酸含量较高[14]。
有关荔枝果肉的功能性有效成分的研究，国内外都有报道。
日本学者Minakata等报道荔枝果肉提取物在抗诱变方面具有较好的效果。
Shela等[15]研究发现荔枝鲜果中总的多酚含量为 3.35mg/100g鲜果，五倍子酸的含量为 307.2 ug/100g鲜果，这些成分可能对人体有保健功能。
第二章 不同荔枝品种多糖含量及不同干燥方法对其抗氧化活性的影响
2.1 引言
荔枝品种是由来自一个实生单株的营养繁殖系的群体组成。
通常认为生产种植广、栽培面积大、产量较高、适应性较强、品质较好的品种为优良品种。
荔枝品种在生产上具有一定的经济价值，且遗传组成基本相同，遗传性状稳定。
广东省作为我国荔枝的第一产区，种质资源之丰富为世界鲜见[1]，目前已经收集和记载的优良品种、品系和单株就有 200 个以上，
其中作为商品性生产栽培面积 2000 亩以上的主栽品种就有 26 个，包括：三月红、白糖罂、白蜡、状元红、园枝、大造、进奉、妃子笑、黑叶、怀枝、桂味、糯米糍、挂绿、雪怀子、红糯、香荔、尚枝等[2]。
目前还没有关于荔枝多糖含量与品种差异的报道，而且荔枝在品种上存在同名异物，同物异名及多名的现象比较严重。
所以，本章从广东省果树研究所荔枝资源库中选取经果树所专家鉴定的在广东省主栽的 21 个荔枝品种，研究其活性成分，以期弄清楚广东地区主栽荔枝品种间多糖含量的差别，为后续研究材料的选取提供依据。
荔枝生产季节比较集中，不容易保藏，所以大量荔枝需要通过加工消化。
目前，荔枝加工主要是荔枝干，占全部荔枝加工品的 80%以上[3]。
传统荔枝干的加工方法主要有日晒法和火焙法，这两种方法加工的荔枝干风味较淡，果肉颜色较深，烘干过程干燥不均匀等。
微波干燥起源于 20 世纪 40 年代，微波辅助干燥技术已经广泛应用于食品工业和农产品加工等领域[4]。
研究发现微波干燥与传统干燥方法相比较提高了干燥速率，减少了干燥时间，提高了工业产量和产品的品质[5-7]。
目前，微波干燥技术已被应用到农产品的干燥技术的研究中[8-12]，在果蔬产品干燥方面，分别对荔枝[13]、龙眼[14-15]等进行了微波干燥研究。
2.2 材料与方法
2.2.1 荔枝原料
荔枝为采自广东省农业科学院果树研究所的新鲜荔枝。
所采摘的荔枝大小、形状和成熟度尽可能保持均一。
根据荔枝成熟时间及栽培面积，选取广东地区21个品种，其中早熟品种包括：称砣、白蜡、妃子笑、白糖罂、园枝、黑叶、大造、状元红8个品种;
中熟品种包括：丁香、桂味、鸡嘴、青皮、田岩、水晶球6个品种;晚熟品种包括：糯米糍、红糯、玉荷包、挂绿、怀枝、尚枝、雪怀子7个品种。
干燥方法试验采用荔枝品种为黑叶，采自广东省农业科学院果树研究所的新鲜荔枝。
所采摘的荔枝大小、形状和成熟度尽可能保持均一。
2.2.2 主要试剂
试剂名称 规格 产地和生产厂家
重蒸酚 分析纯 北京鼎国生物技术有限公司
正丁醇 分析纯 广州化学试剂厂
氯仿 分析纯 广州化学试剂厂
牛血清白蛋白 分析纯 上海伯奥生物科技有限公司
考马斯亮蓝 G-250 分析纯 北京鼎国生物技术有限公司
没食子酸 分析纯 上海中药标准化研究
中心硫酸亚铁 分析纯 西安化学试剂厂
碳酸钠 分析纯 汕头市光华化学厂
葡萄糖 分析纯 广州化学试剂厂
第三章 荔枝果肉多糖的提取工艺优化研究……………38
3.1 引言……………………………38
3.2 材料与方法………………………38
3.3 结果与讨论……………………………42
3.4 本章小结…………………………………58
参考文献………………………………58
第四章 荔枝多糖分级沉降制备、纯化及结构表征……………62
4.1 引言…………………………………62
4.2 材料与方法……………………63
4.3 结果与分析…………………69
4.4 本章小结………………………………88
参考文献……………………………90
第五章 荔枝多糖抗氧化护肝功能研究
5.1 引言
生物体内氧化代谢会产生游离状态，带有不配对电子的分子、原子或离子，即自由基，包括超氧阴离子自由基(O2-)，羟基自由基(·OH)、过氧化氢(H202)、单线态氧(1O2)等活性氧[1]。
其特点是：(1)非常活跃，具有很强的氧化能力;(2)不稳定，只能瞬时存在;(3)能持续进行连锁反应。
在正常情况下，人体内的自由基处于动态平衡中，但是一旦该平衡被打破，就会对机体造成损害，从而引发一系列相关疾病[2]。
据报道，由氧自由基引起的疾病，已超过 100 余种，如：高血压、糖尿病、老年痴呆症等[3-4]。
目前，已发现多种植物和真菌多糖具有体内外的抗氧化作用。
木耳多糖[5]、枸杞多糖[6]、天门冬多糖[7]、云芝多糖[8-9]、中华猕猴桃多糖[10]等具有体外直接清除活性氧的作用。
螺旋藻多糖[11]、黄精多糖[12]、毛木耳多糖[13]可提高生物体内SOD的活力，对活性氧产生的伤害，有明显的改善作用。
CC14是经典的动物急性肝损伤造模的毒剂，CCl4经肝细胞微粒体内的P-450 酶系代谢后，产生自由基，使细胞膜、内质网膜等发生氯烷化和脂质过氧化，
损伤膜的结构和功能，细胞内谷丙转氨酶(ALT)溢出并进入血液，使血清中ALT水平提高，一般认为ALT的升高水平与肝细胞的损伤程度相关[14-16]。
第六章 结论与展望
6.1 结论
本论文对荔枝品种的多糖含量、荔枝干的干燥方式、多糖的提取、分离纯化、结构表征及其理化性质与抗氧化护肝活性等方面进行了较为系统的研究，得到以下结论：
(1)比较 21 个荔枝品种多糖含量，结果表明不同品种的多糖含量差异较为显著，在所选定的品种中，多糖含量极差达 15.09g/kg，变异系数为 75.77%，其中 76%的品种多糖含量分布在 2.0-6.0g/kg 之间，多糖含量最高的品种为黑叶(1
5.72g/kg)，最低的品种为丁香(0.63g/kg)，本文选定黑叶为提取多糖及多糖结构和生物活性研究材料。
(2)比较晒干、热风干燥、微波干燥、真空干燥和冷冻干燥处理对荔枝多糖含量及抗氧化活性的影响，结果表明 5 种干燥处理所得的荔枝干多糖含量及其对自由基清除能力差异不显著;
但对 Vc 和总酚含量影响非常明显，二者含量明显减少，仅冷冻干燥处理对酚类物质的影响较小;蛋白质和各种氨基酸含量也有下降，但变化不明显。
(3)分别建立荔枝多糖的热水浸提、微波辅助提取和超声波辅助提取的优化工艺条件，结果表明，采用热水浸提荔枝多糖的适宜条件为 pH 8.0，
提取时间 3.6 小时，提取温度为65℃，液/料比为14:1，此条件下的最高提取率为24.29%，实际提取率为24.02%,与理论值相比，相对误差为 1.12%左右;
采用微波提取荔枝多糖的适宜条件为 pH 为 8.2，时间 14.5min，微波功率 580w，液/料比为 11.4:1，此条件下的最高提取率为 24.33%，实际提取率为 24.12%, 与理论值相比，
相对误差为 0.87%左右;采用超声提取荔枝多糖的适宜条件为 pH 为 8.0，时间 30min，超声功率 68.85w，液/料比为 10:1，此条件下的最高提取率为 24.32%，
实际提取率为 24.52%, 与理论值相比，相对误差为 0.81%左右。
比较 3 种提取方法，提取率依次为：微波提取>超声提取>热水浸提;提取时间长短依次为：热水浸提>超声提取>微波提取。
参考文献(略)
生物论文学术【2】
探讨新西兰大白兔球周注射曲安奈德后的病理变化
前 言
二十世纪五十年代初，糖皮质激素开始应用于眼科，治疗严重的眼部感染，眼内炎，它通过减少炎性物质的渗出、抑制成纤维细胞的增生和炎性肉芽组织的形成来达到控制炎症的目的[1]。
曲安奈德( triamcinolone acetonide, TA )又称曲安缩松, 是一种人工合成的由去炎松的基础上发展而来，含氟的长效肾上腺糖皮质激素。
上世纪八十年代，为使药物在眼内局部达到较高浓度且维持长时间的作用，临床上开始采用玻璃体腔内注射曲安奈德(TriamcinoloneAcetonide，TA)注射液，
以治疗和控制糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)、视网膜中央静脉阻塞(obstruction of the central retinal vein，CRV)、前葡萄膜炎(anterior uveinis，AU)、
囊样 黄 斑 水 肿 ( cystoid macular edema ， CME)、 脉 络 膜 新 生 血 管 ( choroidnoerascularigation,CNV)[2-5]等眼科疾病;
还应用于玻璃体切割术[6]以及其它眼科手术后的辅助治疗。
随着玻璃体内注射的广泛应用，越来越多严重的并发症随之出现，如眼内炎[7]、高眼压[8]、晶体损伤[9]等，限制了其临床应用，因此国内外许多学者对于某些病历开始尝试选择球周注射 TA[10]。
与玻璃体腔注射相比，球周注射后药物通过巩膜渗透到眼内，虽然在玻璃体腔内不能达到较高浓度，但具有风险小、易重复注射等优点[11]，更易被患者接受。
基于曲安奈德注射液球周注射的诸多特性，球周注射类固醇药物逐渐被广泛应用于角膜炎，葡萄膜炎等轻中度的眼前节疾病的临床治疗。
国内外实验表明：(1)球周注射皮质激素能有效治疗玻璃体视网膜病变;(2)球周注射曲安奈德是一个能有效的治疗葡萄膜炎的方法;(3)球周注射曲安奈德能够治疗甲状腺相关的眼病，并有持续疗效。
曲安奈德注射液注射于球周能有效发挥作用，取得良好的效果，更避免了玻璃体内注射带来的各种并发症，很大程度上减少了患者的痛苦。
材料与方法
1 实验材料
1.1 研究对象
1.1.1 实验动物
新西兰兔24只，雌雄不限，清洁级，6月龄，体重2.5-3kg，均购于新疆医科大学实验动物中心。
实验动物使用许可证号：SYXK(新)2010-0002。
1.1.2 动物饲料
普通饲料(新疆维吾尔自治区实验动物中心)：大麦30%，玉米5%，豆饼15%，青干草47%，无机盐及维生素添加剂3%，每50千克饲料添加蛋氨酸100克。
1.2 主要试剂
主要试剂有：曲安奈德注射液(昆明积大制药厂)、红霉素眼膏(山东博士伦福瑞达制药有限公司) 、
盐酸左氧氟沙星滴眼液(山东博士伦福瑞达制药有限公司)、硫酸阿托品注射液(广东南国药业有限公司)、盐酸氯胺酮注射液(辽宁卫星制药厂) 、盐酸丁卡因滴眼液(四川制药) 。
2 实验方法
2.1 实验的分组方法
健康新西兰兔24只，雌雄不限，清洁级，6月龄，体重2.5-3kg，适应性喂养1周，观察无异常后随机分为2组，实验组及对照组各12只。
2.2 动物的喂养
实验历时共12周，整个实验期间均饲养于新疆医科大学动物实验中心兔饲养室，均单笼饲养，饮水不限。
2.3 球周注射
球周注射步骤如下：(1)麻醉：使用 1mg 硫酸阿托品注射液和 2mg 盐酸氯胺酮注射液行全身麻醉;
(2)消毒用粘膜型碘伏滴入结膜囊内，五分钟后生理盐水冲洗，并使用碘伏擦拭眶周眼睑区域 2-3 遍;
(3)用 1ml 注射器按照组别不同分别抽取曲安奈德注射液 0.5ml 和 PBS 溶液 0.5ml;
(4).注射方法：自颞下眶缘缓慢进针，紧贴眶底，沿矢状面前行达眼球赤道部，回抽无血缓慢注射药液，拔出针头，局部棉签压迫。
结果 ................15-20
讨论
糖皮质激素是眼科临床上应用比较广泛的药物, 上世纪八十年代起，为达到药物在眼内局部高浓度和长时间的持续作用，临床上开始运用长效糖皮质激素制剂曲安奈德
(TriamcinoloneAcetonide，TA)注射液进行玻璃体腔内注射，用以治疗和控制糖尿病视网膜病变、中央静脉阻塞、增生性玻璃体视网膜病变、脉络膜新生血管等眼科疾病;还应用于其它眼科疾病的辅助治疗如Graves眼病和小儿肉芽肿等。
随着玻璃体内注射的广泛应用，较多的严重的并发症随之出现，例如眼内炎、高眼压、晶体损伤等，因此国内外开始在炎症较轻的病案中选择球周注射TA。
球周注射，药物是通过巩膜渗透到眼内，Michael等[12]研究表明球周注射曲安奈德,如果药物释放的速度大于结膜下血管和淋巴管的清除速度,药物即可透过巩膜到达玻璃体腔。
总结
1.球周注射曲安奈德注射液诱导新西兰大白兔球周的肌肉组织萎缩。
2.球周注射曲安奈德注射液影响了新西兰大白兔球周的哈氏腺的正常代谢呈增生性改变。
3.球周注射曲安奈德注射液对眼内压无影响。
参考文献(略)
生物论文学术【3】
各留置物对新西兰白兔血液生化、细胞因子、凝血功能的影响
前言
有报道钛夹进入胆总管，以钛夹为核心形成胆总管结石;移动至右卵巢引起盆腔疼痛：移入盆腔或右髂窝症状类似阑尾炎和输尿管结石;因钛夹形成的腹腔脓肿等;金属夹导电，电凝器接触它时引起接触组织的烧伤。
丝线结扎处理虽较安全，但体内和体外打结均较费时，且对较深处打结难度较大，多数腹腔镜医生尚未熟练掌握。
可吸收材料的应用是微创手术的发展趋势。
可吸收聚合夹(外科止血夹)。
是由人工合成可吸收聚脂材料制成，夹子装在一圆筒形弹匣内，无毒，无致热源，其酯化物在特异酶作用下分解为水和二氧化碳后主要由尿液排出体外。
由于可吸收结扎夹的夹闭端是倒锁齿型的，可吸收结扎夹两钩端必须完全暴露出来才能夹紧可靠，这就使手术者要求游离出更长的夹闭管腔空间和更高的手术技巧，才能使手术顺利、安全地完成。
可吸收结扎夹封闭管腔在术中出血量方面与丝线组无明显差异，这与手术者的技术熟练程度有关，在其术后并发症方面也无差异，这就提示我们在封闭胆囊管或胆。
第一部分华阳可吸收结扎夹止血效果及夹闭效果研究
1.1实验材料
1.1.1实验动物
健康成年新西兰大白兔，雌雄各半，随机分组，体重1.8-2.2kg，由广西医科大学实验动物中心提供(实验动物使用许可证：SCXK桂2009-0002)。
1.1. 2供试品及阳性对照品
供试品：华阳可吸收结扎夹，惠州华阳医疗器械有限公司(规格：A12,批号：L200909002)。
阳性对照品1:医用1号缝合线，十.医用缝合线厂牛产(规格：3-0#，批号20090112)。
阳忡对照品2:《^科可吸收结扎火，Tyco Healthcare Group L.P (规格：12mm Lapro-Clip ，批号：LOTNOA0167)。
1. 2实验方法
1.2. 1实验分组
共分为4组，分别为正常对照组、阳性对照组1 (丝线组)、阳性对照组2 (泰科组)、受试组(华阳组)。
1.2. 2药品的配制
10%水合氯酸溶液：20.0g水合氯醛加入200mL生理盐水(Normal Saline,NS)中，搅拌均匀，配成10%溶液，现配现用。
新西兰大白兔使用剂量为3-5mL/ kg。
青霉素、链霉素：用相应体积NS溶解，现配现用。
1.2.3手术方法
4组动物术前耳缘静脉取血5 mLX2管，除正常对照组外，其余各组新西兰大白兔称重，术前肌肉注射青霉素(10万U/ kg)。
用10%水合氯醛(3-5ml/kg)从其耳缘静脉实施麻醉，备皮、消毒、打开腹腔，充分暴露胆囊，旁幵0.2cm剪开漿膜层，逆行剥离胆囊至胆囊管，
分别用丝线或可吸收夹进行结扎或夹闭胆囊管及胆囊动脉欲切断处的近端，其胆囊管及胆囊动脉切断处的远端使用一个止血钳夹闭，切断胆囊管和胆囊动脉，取出切除胆囊。
观察无出血及胆漏，术毕，逐层缝合，消毒，并腹腔注射链霉素(25万U/ kg),放回饲养笼，1^由饮食，喂常规混合t'ij料。
术后二天，切;天肌肉注射青霉素(20万U/只)、链露素(50万U/只)及3%过氧化M溶液、碘伏溶液消毒换药以防止伤口感染化脓，并大观察新两:>^人|'1兔活动状态、进食量。
第二部分 华阳夹对新西兰白兔肝肾组织病理组织学的影响 .........20-40
2.1 实验材料 ...............20-21
2.2 实验方法 ..............21-23
2.3 实验结果................ 23-38
2.4 实验讨论............. 38-40
第三部分 各留置物对新西兰白兔血液生化、细胞因子、凝血功能的影响
3. 1实验材料
3. 1. 1实验动物
健康成年新西兰大白兔，雌雄各半，随机分组，体重1.8-2.2kg，由广两I矢科大学实验动物中心提供(实验动物使用许可证：SCXK桂2009-0002)。
3. 1.2供试品及阳性对照品
供试品：华阳可吸收结扎夹，惠州华阳医疗器械有限公司(规格：A12,批号：L200909002)。
阳性对照品1:医用1号缝合线，上医川缝合线)'牛:产(规格：3-0#,批号20090112)。
阳性对照品2: 泰科可吸收结扎火，Tyco Healthcare Group L.P (规格：12mm Lapro-Clip ，批号：LOTNOA0167)。
总结
(1)在术中出血量的比较结果表明，华阳夹在处理较深部位手术难度明显优于丝线结扎，且手术时间及术后并发症方面与同类产品泰科夹比较无明显统计学差异，华阳夹用于夹闭胆囊管残端及胆囊动脉是安全的。
(2)从肉眼观察，华阳组在术后4周水肿消退后，肝色基本与正常组相同：肝色均一红润，柔软、有光泽。
光镜下观察有不同程度水变性，但无坏死及纤维变性;胆囊管残端术后开始出现大量纤维组织增生及异物肉芽肿形成。
电镜下观察肝细胞超微结果无明显改变。
故可以证明华阳夹对新两兰白兔肝脏、肾脏在病理组织学方面无明显损害。
(3)在肝肾功能生化指标检测中表明，华阳夹对新两兰1'1兔肝'I予功能明显损齊，故:rt在胆囊摘除术屮的应用与同类产品^^科夹的疗效是相同并安全的。
(4)手术后2， 3， 4周IL-6、 IL-8和TNF-a A !ft均有增势，似各組'jili常组间比较无统计学差^。
表明^阳火i"n十部刺激及下术创伤引起的炎症反应对机体肝'If功能影响不大，在动物肌囊摘除术屮的应川是安全的，其疗效与同类产品泰科火相"1。
(5)术前及术后2, 3, 4周各组PT、 APTT. FIB. INR、 TT的比较尤统计学差异，表明华阳夹对新两兰白兔的凝血功能无明显影响。
参考文献(略)
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