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HPLC法同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中3组分的含量论文
目的 建立测定复方利血平氨苯蝶啶片中氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，以氰基柱(4.6 mm × 250 mm，10 μm)为色谱柱，以0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液（用体积分数20%磷酸调节pH值至2.7）?乙腈（体积比85∶15）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为316 nm。结果 氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶分别在60～180 μg/mL的浓度范围内有良好的线性关系(r=0.999 9)；氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶平均加样回收率分别为100.2%、100.1%和100.3%，RSD值分别为0.36%、0.85%和0.83% （n=9）。结论 本方法简便、快速、准确度高，可用于复方利血平氨苯蝶啶片的质量控制。Abstract:Objective To establish an HPLC method for simultaneous determination of hydrochlorothiazide, dihydralazine sulfate and triamterene in compound reserpine? triamterene tablets. Method Samples were analyzed on a reversed?phase CN column (4.6 mm × 250 mm，10 μm) with 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate (adjusted with 20% H3PO4 to pH2.7)?acetonitrile (85∶15) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength 316 nm. Results The calibration curves were linear over the range of 60～180 μg/mL(r=0.999 9) for hydrochlorothiazide, dihydralazine sulfate and triamterene. The average recoveries were 100.2% (RSD=0.36%, n=9) for hydrochlorothiazide, 100.1% (RSD=0.85%, n=9) for dihydralazine sulfate, and 100.3% (RSD=0.83%, n=9) for triamterene. Conclusion The method is simple, sensitive and accurate, which could be used for the quality control of compound reserpine?triamterene tablets.
Key words:HPLC；compound reserpine?triamterene tablets；hydrochlorothiazide；dihydralazine sulfate； triamterene
复方利血平氨苯蝶啶片是由氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平制成的复方制剂，用于治疗轻、中度高血压，氢氯噻嗪和氨苯蝶啶合用能增强利尿作用，硫酸双肼屈嗪和利血平合用对降压效果有协同作用，收载于国家药品标准：化学药品地方标准上升国家标准第十三册［1］。原标准用HPLC法分析，分别用不同波长，不同溶剂各自测定氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，方法费时、麻烦。有关高效液相色谱法测定复方降压片中三组分含量的研究曾有报道［2］，但该方法是测定利血平、氢氯噻嗪和氯氮革的含量，现国家标准处方已删去氯氮革成分。本文参考国家标准，采用高效液相色谱法同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中的氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，方法快速、简便、准确，稳定性、重现性好，适用于本品的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC?10AT型高效液相色谱仪，SPD?10A型紫外检测器，HW?2000色谱工作站。
1.2 试药
氢氯噻嗪对照品（批号：10039-200001）、硫酸双肼屈嗪对照品（批号：100514-200301）、氨苯蝶啶对照品（批号：100429-200401）均由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，庚烷磺酸钠、磷酸为分析纯，水为去离子水，复方利血平氨苯蝶啶片（北京双鹤药业有限公司生产，批号分别为070603 D，071004 D，071012 C）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Spherisorb CN柱（4.6 mm × 250 mm，10 μm）；流动相：0.01 moL/L庚烷磺酸钠溶液（用体积分数20%磷酸调节pH值至2.7）?乙腈（体积比85∶15）；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：316 nm；进样量：20 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取105 ℃干燥1 h后的氢氯噻嗪对照品和80 ℃减压干燥4 h后的硫酸双肼屈嗪对照品和氨苯蝶啶对照品适量，加甲醇?水（体积比30∶70）超声处理使溶解并制成各含0.12 mg/mL的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氢氯噻嗪12.5 mg），置100 mL量瓶中，加甲醇?水（体积比30∶70）适量，超声处理20 min，放冷，加甲醇?水（体积比30∶70）稀释至刻度，摇匀，离心（3000 r/min）10 min，取上清液为供试品溶液。取甲醇?水（体积比30∶70）为空白溶液。
取对照品、供试品和空白溶液，按上述色谱条件各进样20 μL，记录色谱图，见图1。
2.3 线性试验
精密称取氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶对照品各30 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇?水（体积比30∶70）适量，超声处理并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分别置20 mL量瓶中，加甲醇?水（体积比30∶70）稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL，按上述色谱条件测定。以峰面积（A）对浓度（ρ）进行回归， 得回归方程氢氯噻嗪为ρ=0.0001293A+5.606，r=0.999 9；硫酸双肼屈嗪为ρ=0.0002904A+24.531， r=0.999 9； 氨苯蝶啶为ρ=0.000106A+10.779， r=0.999 9；表明3种成分在60～180 μg/mL的浓度范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
取“2.2.1”项下的对照品溶液，重复进样6次，记录其峰面积，计算得氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶峰面积的RSD分别为0.38%、0.64%和0.45%，表明方法的精密度良好。
2.5 重复性试验
取复方利血平氨苯蝶啶片（批号：071004 D）按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.8”项下方法测定含量，结果分别为：氢氯噻嗪98.3%，RSD=0.86%，n=6；硫酸双肼屈嗪104.6%，RSD=0.61%，n=6；氨苯蝶啶99.4%，RSD=0.84%，n=6。表明本法重复性好。
2.6 稳定性试验
取“2.2.1”项下的对照品溶液，在室温条件下放置，分别在0、1、2、4和8h进样，记录色谱图，计算各峰面积的RSD分别为氢氯噻嗪0.36％，硫酸双肼屈嗪 0.89％，氨苯蝶啶0.72％，表明溶液在室温放置8 h内稳定。
2.7 加样回收试验
取已知含量的片粉（批号：070603 D），分别精密称定适量（约相当于氢氯噻嗪2.5、3.0和3.6 mg）置50 mL量瓶中，各3份，分别精密称定氢氯噻嗪，硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶对照品约2.5、3.0和3.6 mg各3份，加入上述量瓶中，按“2.2.2”项下的方法，自“加甲醇?水（体积比30∶70）适量……起”操作，配制成相当于含量测定浓度的80％、100％、120％的溶液，各进样20 μL，记录色谱图，计算回收率，结果见表1-3。表1 氢氯噻嗪回收率试验结果（略）表2 硫酸双肼屈嗪回收率试验结果（略）表3 氨苯蝶啶回收率试验结果（略）
2.8 样品含量测定
分别取上述对照品与供试品溶液20 μL，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以外标法计算样品中氢氯噻嗪，硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，结果见表4。表4 样品含量测定结果（略）
3 讨 论
3.1 取氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶对照品溶液分别进行紫外扫描，氢氯噻嗪在 270 nm和316 nm波长处有最大吸收，硫酸双肼屈嗪在313 nm波长处有最大吸收，氨苯蝶啶在363 nm波长处有最大吸收。由于在316 nm波长处测定氢氯噻嗪和氨苯蝶啶同样有较高的灵敏度，故选用氢氯噻嗪有最大吸收的316 nm作为测定波长。
3.2 供试品溶液制备过程中，曾用流动相、甲醇?水（体积比30∶70）等溶剂进行溶解试验，结果表明，本文选用甲醇?水（体积比30∶70）作溶剂，超声处理20 min可同时溶解3种成分，效果较好，且操作简便。用流动相为溶剂时，硫酸双肼屈嗪在酸性流动相介质中不稳定，峰面积在30 min内下降约30％。
3.3 本文用HPLC法同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中的氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪和氨苯蝶啶的含量，操作简便，快捷，灵敏度高，重复性好，测定结果准确，可用于复方利血平氨苯蝶啶片的质量控制。
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