- 相关推荐
HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量论文
目的 建立安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定方法。方法 采用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，检测波长是202 nm，流速是1 mL·min-1，柱温是30 ℃。结果 盐酸水苏碱在5.625～28.125 μg内有良好的线性关系，r＝0.9992，回收率为100.3％，RSD为2.4％。结论 本法专属性强，准确、简便，可为安坤益母草片的质量标准提供依据。安坤益母草片是由作者经由安坤益母草膏改剂型而得，由益母草、川芎、白芍、地黄、当归等药材组成。具有养经调血、化淤生新的功效，临床上主要用于血淤气滞引起的月经不调、行经腹痛、量少色暗、产后淤血不净等症，取得满意效果。益母草是方中君药，盐酸水苏碱是有效成分之一，其测定方法有雷氏盐沉淀溶解比色法［1］、紫外分光光度法［2］、薄层扫描法［3］、HPLC法［4］等。为更好地控制制剂质量，确保临床疗效，本文采用HPLC法测定盐酸水苏碱的含量，结果表明方法专属性强、精密度高、分离度好，可用于控制安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定。
1 仪器与试药
WATERS2695-2996型高效液相色谱仪（美国）。安坤益母草片（自制）；盐酸水苏碱对照品（批号：712-9903，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：氨基柱（250 mm×4.6 mm,5 μm），大连依利特公司；流动相：乙腈-水（体积比78∶22）；流速：1 mL·min-1；检测波长：202 nm；柱温：30 ℃；进样量：15 μL。在此条件下，供试品中盐酸水苏碱峰能达到基线分离，理论板数按盐酸水苏碱峰计应不低于4 000，分离度均是3.6。见图1～3。
图1 盐酸水苏碱对照品HPLC图谱（略）
Fig.1 HPLC chromatogram of stachydrine hydrochloride
图2 安坤益母草片HPLC图谱（略）
Fig.2 HPLC chromatogram of Ankun Motherwort tablets
图3 安坤益母草空白片HPLC图谱（略）
Fig.3 HPLC chromatogram of blank control of Ankun Motherwort tablets
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸水苏碱对照品11.25 mg置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，得到1.125 mg/mL的盐酸水苏碱对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品5片（0.25 g/片），除去薄膜衣，研细，精密称取0.25 g，置具塞锥形瓶中，精密加入20 mL乙醇，超声处理30 min，滤过，滤渣及容器用20 mL乙醇分次洗涤，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至10 mL的量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心（5 000 r/min，5 min），取上清液作为供试品溶液。
2.2.3 盐酸水苏碱空白供试液的制备 按处方称取除益母草外的药材提取，取处方比例辅料，按安坤益母草片制备工艺制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2”项下制备方法制得空白对照供试液。
2.3 标准曲线的制备
精密量取盐酸水苏碱对照品溶液(1.125 mg/mL) 5、7、10、15、20、25 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定盐酸水苏碱色谱峰面积，以盐酸水苏碱微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=5.89×104x-1.52×104 (r=0.9992)，线性范围：5.625～28.125 μg。
2.4 干扰试验
按“2.1”色谱条件，取盐酸水苏碱对照品溶液、供试品溶液、空白供试液，分别注入液相色谱仪，结果表明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上，有一相同的色谱峰，而空白供试液在此保留时间内不出峰，表明其他成分对测定盐酸水苏碱无干扰。
2.5 精密度试验
取对照品溶液(1.125 mg/mL) 15 μL，重复进样6次，记录盐酸水苏碱的峰面积。结果盐酸水苏碱峰面积RSD＝0.8％。
2.6 稳定性试验
取上述供试品溶液15 μL，分别在0、2、4、8、16、24 h进样，记录盐酸水苏碱的峰面积，结果盐酸水苏碱峰面积的RSD=1.2%(n=6),表明供试品溶液在制备后24 h内测定基本稳定。
2.7 重复性试验
取同一批安坤益母草片(批号：20070412)6份，按“2.2.2”项方法处理样品并测定盐酸水苏碱峰面积，计算盐酸水苏碱含量，结果RSD=1.7%，表明此方法测定盐酸水苏碱含量重复性好。
2.8 加样回收试验
精密称取已知含量的样品(批号20070406，盐酸水苏碱含量10.8 mg/片)6份，每份取样量为供试品取样量（0.25 g/片）的50％，按“2.2.2”项方法操作，以当前取样含量的1∶1，分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液（1.08 mg/mL）5 mL，制备加样回收供试品溶液，按含量测定条件测定，计算回收率，结果见表1。
表1 盐酸水苏碱回收率试验结果 (n=6)（略）
Tab.1 Recovery of Stachydrine Hydrochloride
2.9 样品测定
取5批（批号20070510、20070513、20070520、20070517、20070519）10个样品，按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定。结果安坤益母草片盐酸水苏碱平均含量是10.33 mg/片。
3 讨论
盐酸水苏碱结构中既含有碱性的NH4+，又含有酸性的COOH-，分子量小，极性大，在常规的C18柱中难保留［5］。以常规的生物碱分析方法很难将盐酸水苏碱分离，最后参考文献［6］改用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，在此条件下，盐酸水苏碱不仅能得到较好的保留，而且与其他峰完全分离，分离度达到要求。
【HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量论文】相关文章：
益母草中益母草碱的HPLC检测论文10-09
HPLC法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量10-06
HPLC法测定不同采收期小叶榕叶中异牡荆苷的含量论文10-09
HPLC法同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中3组分的含量论文10-09
HPLC测定小麦胚芽油营养胶囊中维生素E的含量论文10-09
HPLC法同时测定美敏伪麻口服溶液中3组分的含量论文10-09
利用HPLC-FLD对大鼠5-HT含量测定实验分析的药学本科毕业论文10-06
气相色谱法测定角鲨烯软胶囊中角鲨烯含量10-05